創傷治癒アッセイ

In vitroスクラッチアッセイとしても知られる創傷治癒アッセイは、培養細胞単層における細胞の遊走および創傷閉鎖を測定するために広く使用されている方法です。 このプロトコールでは、コンフルエント細胞単層に創傷またはギャップを作成し、時間の経過とともにクリア領域への細胞の動きをモニタリングします。 これは、細胞運動性に関する定量的データを提供するシンプルで費用対効果の高い方法であり、薬物、成長因子、または遺伝子改変の効果を評価するのに最適です。 このアッセイにより、実験設定に応じて、集団移動および個々の細胞の遊走のための全細胞質量の分析が可能になります。 アブカムの標準化された創傷治癒アッセイプロトコールは、再現性と明瞭さを保証し、がん生物学、再生医療、創薬における研究者をサポートします。 このアッセイは、ImageJなどのイメージングソフトウェアと互換性があり、正確な創傷閉鎖解析が可能です。

はじめに

細胞の遊走は、発生、免疫応答、癌転移を含む多数の生理学的および病理学的プロセスにおいて重要な役割を果たしています。 創傷治癒アッセイは、この挙動をin vitroで評価するための簡単なアプローチを提供します。 細胞単層内の創傷をシミュレーションすることにより、研究者は細胞が損傷様状態にどのように反応するかを観察することができます。 このアッセイは、細胞の運動に影響を与える化合物のスクリーニングや、組織再生の根底にある分子メカニズムの研究において特に有用です。 アブカムのプロトコールは、このアッセイを一貫性を持って実施するための信頼性の高いフレームワークを提供し、細胞力学と治療介入を調査するラボにとって頼りになる方法です。

背景と原則

創傷治癒アッセイは、集団的な細胞の遊走の原理に基づいています。 これは、研究で使用されるいくつかの細胞の遊走アッセイの1つです。 スクラッチは接着細胞のコンフルエント単層に導入され、セルフリーゾーンを形成します。 時間が経つにつれて、このギャップに細胞の遊走が生じ、自然創傷治癒プロセスを模倣します。 創傷閉鎖の速度および程度は、細胞の遊走能力を示します。 このアッセイには特殊な装置は不要で、標準的な細胞培養ツールとイメージングシステムを使用して実施できます。 定量分析は、通常、ImageJのようなソフトウェアを使用して行われます。ImageJは、経時的な創傷幅の減少を測定し、さまざまな実験条件下での細胞挙動に関する洞察を提供します。

トランスウェル遊走法やボイデンチャンバー法と比較して、創傷治癒アッセイはよりシンプルで視覚的に直感的です。 創傷治癒アッセイは、細胞の遊走アッセイの一種であり、特に全細胞質量の集団遊走を測定するのに適しており、他のアッセイは個々の細胞遊走に焦点を当てることができます。 トランスウェルアッセイは膜を通る走化性遊走を測定しますが、スクラッチアッセイは表面を横切る集団的な横方向の動きに焦点を当てます。 細胞外マトリックスを通した動きを評価する3D侵襲アッセイとは異なり、創傷治癒アッセイは厳密に2次元です。 その主な利点は、セットアップの容易さ、低コスト、リアルタイムの可視化です。 しかし、複雑な環境での単細胞の遊走や侵襲的行動の研究にはあまり適していない可能性があります。 ハイスループットのニーズには、特殊なキットや自動イメージングシステムにより、スケーラビリティが強化される場合があります。

ステージ1 - 方法

必要な資材

• コンフルエントフラスコまたは細胞プレート
• 12ウェル培養プレート
• 適切な増殖培地（特定の細胞タイプに必要な血清、増殖因子、低分子を含むもの）
• 酵素または化学的細胞剥離剤（接着細胞または半接着細胞の場合）
• 標準的な細胞培養用消耗品（セロロジカルピペット、ピペットチップ、遠心管、70%エタノール、滅菌PBSなど）
• 評価中の治療
• 標準的な細胞培養用機器（ピペットボーイ、ピペット、封じ込め設備、遠心分離機、光学顕微鏡、細胞計数器または血球計数装置など）
• デジタルカメラ付き光学顕微鏡
• 先端が細い油性マーカー

各ステップ