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共免疫沈降(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)で得られたサンプルには沈降に使用した抗体(イムノグロブリン)が含まれています。サンプルを還元処理して電気泳動およびメンブレンへの転写を行うと、メンブレン上にはターゲット・タンパク質に加え、還元されたイムノグロブリンの H 鎖 (分子量約 50 kDa) と L 鎖(分子量約 25 kDa)も存在することになります。
もし免疫沈降の抗体とターゲット・タンパク質に対する一次抗体の動物種が同じであると、一次抗体反応後に加えた二次抗体が直接メンブレン上の H 鎖および L 鎖と反応し、ターゲット・タンパク質のバンドの他に、50kDa と 25kDa の二本のバンドが現れてしまいます。よってターゲット・タンパク質の分子量が 50k Da または 25 kDa 付近であった場合、ターゲット・タンパク質のバンドが L 鎖または H 鎖由来のバンドと重なり、ウエスタン・ブロッティングの結果の解析において、大きな問題となります。このような問題を回避するための二次抗体製品としてアブカムには、VeriBlot for IP と、L 鎖特異的二次抗体があります。
VeriBlot for IP は還元されていないイムノグロブリンとのみ反応し、H 鎖および L 鎖単独の分子とは反応しない二次抗体で、これを使用すると 50kDa と 35 kDa 付近にイムノグロブリン由来のバンドは現れません。ターゲット・タンパク質の分子量が 50k - 25 kDa 付近、あるいはそれ以下の場合にお勧めです。L 鎖特異的二次抗体は L 鎖のみと反応し、H 鎖とは反応しない製品で、これを使用すると H 鎖由来の 50kDa のバンドは現れません。ターゲット・タンパク質の分子量が 30 kDa よりも大きい場合にお勧めです。
製品にはペルオキシダーゼ(HRP)標識、アルカリフォスファターゼ(AP)標識、ビオチン(Biotin)標識があります。実験に応じてお選びください。
VeriBlot for IP
製品名 | 標識 | 製品番号 |
Anti-Goat IgG VeriBlot for IP | HRP | |
Anti-Mouse IgG VeriBlot for IP | Biotin | |
Anti-Mouse IgG VeriBlot for IP | HRP | |
Anti-Bovine, goat, human, mouse, rat, rabbit, sheep IgG VeriBlot for IP | AP | |
Anti-Bovine, goat, human, mouse, rat, rabbit, sheep IgG VeriBlot for IP | HRP |
L 鎖特異的二次抗体
製品名 | 標識 | 製品番号 |
Anti-Mouse kappa light chain | AP | |
Anti-Mouse lambda light chain | AP | |
Anti-Mouse kappa light chain | AP | |
Anti-Rabbit IgG light chain | AP | |
Anti-Rat kappa light chain | AP | |
Anti-Human lambda light chain | HRP | |
Anti-Mouse kappa light chain | HRP | |
Anti-Mouse lambda light chain | HRP | |
Anti-Rabbit IgG light chain | HRP | |
Anti-Rat IgG kappa light chain | HRP |