製品の概要

  • 製品名

  • 検出方法

    Colorimetric
  • サンプルの種類

    Cell culture supernatant, Plasma
  • アッセイタイプ

    Sandwich (quantitative)
  • 検出感度

    < 30 pg/ml
  • 検出範囲

    40.96 pg/ml - 10000 pg/ml
  • 添加回収試験

    119 %

    特定サンプルでの回収試験
    サンプルの種類 平均 % 測定範囲
    Cell culture supernatant 130.2 118% - 138%
    Plasma 122.8 109% - 138%

  • ステップ

    Multiple steps standard assay
  • 種交差性

    交差種: Rat
  • 製品の概要

    Abcam’s IL-6 Rat ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) kit is designed for the quantitative measurement of rat IL-6 in plasma or cell culture supernatants.


    This assay employs an antibody specific for Rat IL-6 coated on a 96- well plate. Standards and samples are pipetted into the wells and IL-6 present in a sample is bound to the wells by the immobilized antibody. The wells are washed and biotinylated anti-Rat IL-6 antibody is added. After washing away unbound biotinylated antibody, HRP-conjugated streptavidin is pipetted to the wells. The wells are again washed, a TMB substrate solution is added to the wells and color develops in proportion to the amount of IL-6 bound. The Stop Solution changes the color from blue to yellow, and the intensity of the color is measured at 450 nm.


    Due to the relatively low abundance of IL-6 in normal rat plasma, this kit may not be suitable for use with this sample type. We have not been able to detect endogenous Rat IL-6 in normal serum with ab100772, only in serum spiked with Rat IL-6.

  • アプリケーション

    適用あり: Sandwich ELISAmore details
  • 試験プラットフォーム

    Microplate

製品の特性

  • 保存方法

    Store at -20°C. Please refer to protocols.
  • 内容 1 x 96 tests
    20X Wash Buffer Concentrate 1 x 25ml
    400X HRP-Streptavidin Concentrate 1 x 200µl
    5X Assay Diluent B 1 x 15ml
    Assay Diluent C 1 x 30ml
    Biotinylated anti-Rat IL-6 (lyophilized) 2 vials
    IL-6 Microplate (12 x 8 wells) 1 unit
    Recombinant Rat IL-6 Standard (lyophilized) 2 vials
    Stop Solution 1 x 8ml
    TMB One-Step Substrate Reagent 1 x 12ml
  • 研究分野

  • 機能

    Cytokine with a wide variety of biological functions. It is a potent inducer of the acute phase response. Plays an essential role in the final differentiation of B-cells into Ig-secreting cells Involved in lymphocyte and monocyte differentiation. It induces myeloma and plasmacytoma growth and induces nerve cells differentiation Acts on B-cells, T-cells, hepatocytes, hematopoeitic progenitor cells and cells of the CNS. Also acts as a myokine. It is discharged into the bloodstream after muscle contraction and acts to increase the breakdown of fats and to improve insulin resistance.
  • 関連疾患

    Genetic variations in IL6 are associated with susceptibility to rheumatoid arthritis systemic juvenile (RASJ) [MIM:604302]. An inflammatory articular disorder with systemic-onset beginning before the age of 16. It represents a subgroup of juvenile arthritis associated with severe extraarticular features and occasionally fatal complications. During active phases of the disorder, patients display a typical daily spiking fever, an evanescent macular rash, lymphadenopathy, hepatosplenomegaly, serositis, myalgia and arthritis.
    Note=A IL6 promoter polymorphism is associated with a lifetime risk of development of Kaposi sarcoma in HIV-infected men.
  • 配列類似性

    Belongs to the IL-6 superfamily.
  • 翻訳後修飾

    N- and O-glycosylated.
  • 細胞内局在

    Secreted.
  • Information by UniProt
  • 別名

    • Interleukin BSF 2
    • B cell differentiation factor
    • B cell stimulatory factor 2
    • B-cell stimulatory factor 2
    • BSF 2
    • BSF-2
    • BSF2
    • CDF
    • CTL differentiation factor
    • Cytotoxic T cell differentiation factor
    • Hepatocyte stimulating factor
    • Hepatocyte stimulatory factor
    • HGF
    • HSF
    • Hybridoma growth factor
    • Hybridoma growth factor Interferon beta-2
    • Hybridoma plasmacytoma growth factor
    • IFN-beta-2
    • IFNB2
    • IL 6
    • IL-6
    • IL6
    • IL6_HUMAN
    • Interferon beta 2
    • Interferon beta-2
    • Interleukin 6
    • Interleukin 6 (interferon beta 2)
    • Interleukin BSF 2
    • Interleukin-6
    see all
  • 参照データベース

アプリケーション

Our Abpromise guarantee covers the use of ab100772 in the following tested applications.

The application notes include recommended starting dilutions; optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

アプリケーション Abreviews 特記事項
Sandwich ELISA Use at an assay dependent concentration.

画像

  • Representative Standard Curve using ab100772

プロトコール

参考文献

This product has been referenced in:

  • Alkhedaide AQ Anti-inflammatory Effect of Juniperus Procera Extract in Rats Exposed to Streptozotocin Toxicity. Antiinflamm Antiallergy Agents Med Chem 18:71-79 (2019). Read more (PubMed: 30474537) »
  • Sha H  et al. Rheinic acid ameliorates radiation-induced acute enteritis in rats through PPAR-?/NF-?B. Genes Genomics N/A:N/A (2019). Read more (PubMed: 31037524) »
See all 26 Publications for this product

レビューと Q&A

1-10 of 16 Abreviews or Q&A

AbTrial test for rat lung tissue lysate samples

Inconclusive Excellent 5/5 (Ease of Use)
Abreviews
Tried rat lung lysate (in PBS) on kit ab100772, all the readings are either negative or below detection range. So this kit is not a good fit for tissue lysate

Abcam user community

Verified customer

投稿 Feb 09 2016

Abreviews
the product worked effectively.

Newman Osafo

Verified customer

投稿 Dec 17 2014

Question
Answer


The lab adviced the following:

While serum and plasma samples maybe run undiluted, we do not usually recommend doing so. The reason is not because Assay Diluent A needs to be present in every sample but that testing undiluted serum/plasma samples increases the risk of experiencing matrix effects.


Matrix effects occur when some component of the sample affects immunoreactivity of the target molecule, possibly by sequestering binding sites. Auto-antibodies, binding proteins, albumin, etc. may be possible culprits, but it’s hard to say for sure. The result is that the sample may read falsely high or low in the ELISA test, or may give a non-linear dilution response. Sometimes certain disease states contribute to matrix effects by altering the properties of the blood (highly lipemic samples, for instance); hemolysis may also cause similar problems. Matrix effects can be hard to predict and challenging to overcome.


For this reason, we rarely recommend running plasma or serum samples undiluted, as matrix effects are more likely to occur. The lowest dilution factor we normally recommend starting with is 2-fold, even for the low-abundance cytokines. If the customer is concerned that their sample levels will be below detection, keep in mind the optional overnight standard/sample incubation can be performed to try and maximize the absorbances. If that doesn’t work, the customer may want to consider concentrating their samples or switching sample types (for example plasma) to see if that helps.

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Answer


I have the following information for you regarding the kits we discussed:


ab46073:
We have no data regarding normal values observed with IL-6 and IL-4 in rat but as free circulating cytokines are rather dangerous for living animal, the normal level is probably below the detection level.


ab119548:
Unfortunately, we have not tested the rat IL-6 ELISA on normal level in rat samples. We have only tested this ELISA using samples spiked with recombinant protein.


ab100770 and ab100772:
1) What is the normal amount of rat IL4 in serum?
We tested the normal amount of IL-4 in healthy rat serum/plasma samples to be undetectable – 2 pg/ml.

2) What is the normal amount of rat IL6 in serum?
We tested the normal amount of IL-6 in healthy rat serum/plasma samples to be below the detectable limits of this ELISA. Thus, this kit may be more suitable for diseased/treated samples; however, there are some attached tips for increasing sensitivity the customer may use - see below.

3) What is the recommended dilution range for rat serum for IL4 and IL6?
We recommend a 2-fold dilution for serum/plasma samples for use with our IL-4 and IL-6 Rat ELISA kits.


Some advice for what to do if samples are reading below detection limit and how the sensitivity of the kit can be increased:


Incubate sample overnight at 4 degrees C
Increase amount of biotinylated ab (by 1.5 fold or so – too much may increase background)
Incubate biotinylated ab overnight at 4 degrees C
Increase amount of HRP-strep (by about 1.5 fold or so – too much may increase background)
Concentrate sample (using a spin column)



Please note: it’s best to try just one of these modifications at a time. Implementing too many of these changes at once may cause high background.

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Question
Answer

Thank you for your inquiry.

I heard back from the lab that you should try diluting the plasma samples because this minimizes the chances of matrix effects which can lead to inaccurate detection or non-linear responses. Matrix effects happen when some component of the sample affects immunoreactivity of the target molecule, possibly by sequestering binding sites. Auto-antibodies, binding proteins, albumin, etc. may be possible culprits, but it can of course vary depending on the sample. Sometimes certain disease states contribute to matrix effects by altering the properties of the blood (highly lipemic samples, for instance); hemolysis may also cause similar problems. For this reason, we rarely recommend running plasma or serum samples undiluted, as matrix effects are more likely to occur. The quickest and easiest way to deal with matrix effects is to dilute the sample until you obtain a linear dilution response as this will dilute out the interfering components of the sample. Our recommended dilution for rat plasma samples for this kit is 2X, of course, optimal dilution ranges are always determined by the experimenter empirically.

There may be other steps you can take to increase your detection:

Incubate sample overnight at 4 degrees C
Incubate biotinylated ab overnight at 4 degrees C
Increase amount of HRP-strep (by about 1.5 fold or so – too much may increase background)




Please note: it’s best to try just one of these modifications at a time. Implementing too many of these changes at once may cause high background.

I hope this information helps. Please contact us with any other questions.

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Question

Apreciada
Te adjunto más abajo en color rojo las respuestas a vuestros comentarios.
Un saludo
- Ambos kits se pidieron en Junio, si no se han utilizado hasta ahora es posible que haya habido degradación de los reactivos del mismo si no se ha almacenado a la temperatura adecuada. ¿Puedes confirmarme como se ha almacenado el kit, y el vial de estándar después de su reconstitución? ¿Estaba abierta la placa durante tiempo antes de utilizarse?
-Los kits se almacenaron a su llegada en la cámara fría a 4ºC. Las cajas no se desprecintaron hasta el día en que se realizó el kit. El estándar se reconstituyó en el momento de realizar el kit, por lo que no fue necesario almacenarlo. La placa estaba cerrada, ya que como he comentado anteriormente, el kit no se desprecintó hasta el momento de realizar el ensayo.
- Por el protocolo enviado entiendo que las muestras de suero no se diluyeron. Nosotros recomendamos una dilución mínima de 1/2 para muestras de suero o plasma. Si no se diluyen las muestras existe el riesgo de observar efecto matriz (este efecto ocurre cuando alguno de los compuestos de la muestra afectan a la immuno reactividad de la molécula target, enmascarando los sitios de unión). Algunos posibles causantes de ello son los anticuerpos propios, proteínas de unión, albumina etc… El resultado es que la muestra puede dar una lectura falsa, por encima o por debajo de los valores adecuados en un test ELISA, o incluso dar una respuesta no lineal.
Incluso en algunos casos algunas enfermedades contribuyen a crear el efecto matriz alterando las propiedades de la sangre. Este efecto es difícil de predecir y de solucionar.
Por ello no solemos recomendar usar muestras de plasma o suero sin diluir, para evitar este efecto. El factor de dilución mínimo recomendado es 1/2, incluso para la detección de citoquinas poco abundantes como IL1 beta e IL6.
-A pesar de que en los datos que os envié no se observa, las muestras de suero si estaban diluidas a 1/3.
-También sugeriría incubar el anticuerpo por más tiempo. Al menos 2.5 horas, pero lo ideal es dejarlo actuar durante la noche para incrementar la señal.
-Las muestras fueron incubadas durante toda la noche a 4ºC en agitación suave.
Si te parece y estás de acuerdo te propongo ensayar los cambios sugeridos y observar si la señal aumenta. En caso contrario, ya que ambos kits están cubiertos por la garantía Abpromise, se te reemplazarían los kits o reembolsaría el importe de los mismos.
-Debido a que se trataba de muestras de suero de ratas, disponíamos de muy poca muestra, por lo que actualmente nos es imposible volver a analizar las muestras. Por esta razón propongo que nos rembolséis el importe de los dos kits. En un futuro, cuando volvamos a generar muestras, adquiriremos nuevos kits.

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Answer

Perdona por la espera.
Es muy posible que el motivo de la baja absorbancia observada en las placas se deba a la perdida de actividad de alguno de los componentes del kit, debido a su degradación por haberse mantenido durante tantos meses a 4C.
Siempre recomendamos adquirir los productos, especialmente los kits de actividad, cuando vayan a utilizarse. Si se almacenan durante más de un mes es aconsejable mantenerlos a -20C para evitar posibles pérdidas de actividad.
La señal del estándar para el kit de IL6 es baja, sin embargo para el kit IL1beta los valores son aceptables. En este último caso el problema es quizás el background, que provoca la perdida de sensibilidad de la recta del estándar. Adjunto un par de documentos con algunos consejos para obtener señales intensas del estándar en las placas y para disminuir el grado de background.
De todas formas, el problema más común en experimentos de determinación de IL6 e IL1beta, no tiene que ver con el ensayo en sí, sino simplemente con los bajos valores de estas citoquinas.
En suero y plasma estas se encuentran en niveles bajos normalmente. Sin embargo, hay ciertos parámetros que deben mantenerse en estos ensayos para maximizar la probabilidad de que las muestras se encuentren dentro del rango detectable del ensayo:
- Incubar muestras y estándar durante la noche a 4C.
- Incrementar la cantidad de anticuerpo de detección (en 1,5. Demasiado incremento provocaría background)
-Incrementar la cantidad de HRP Streptavidina (de nuevo en 1,5 para evitar la aparición de background)
- Concentrar las muestras (usando, por ejemplo, una columna).
Se recomienda usar cada una de estas modificaciones por separado para evitar de nuevo la aparición de background.
De todas formas dado que ambos kits se encuentran en garantía si deseáis recibir un reembolso o reemplazo no dudes en comunicármelo.
Espero que esta información sea útil. Espero tu respuesta al respecto.

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Question
Answer

Gracias por mantenerte a la espera.
Después de discutir el caso con mis compañeros, hemos comentado lo siguiente:
- Ambos kits se pidieron en Junio, si no se han utilizado hasta ahora es posible que haya habido degradación de los reactivos del mismo si no se ha almacenado a la temperatura adecuada. ¿Puedes confirmarme como se ha almacenado el kit, y el vial de estándar después de su reconstitución? ¿Estaba abierta la placa durante tiempo antes de utilizarse?
- Por el protocolo enviado entiendo que las muestras de suero no se diluyeron. Nosotros recomendamos una dilución mínima de 1/2 para muestras de suero o plasma. Si no se diluyen las muestras existe el riesgo de observar efecto matriz (este efecto ocurre cuando alguno de los compuestos de la muestra afectan a la immuno reactividad de la molécula target, enmascarando los sitios de unión). Algunos posibles causantes de ello son los anticuerpos propios, proteínas de unión, albumina etc…
El resultado es que la muestra puede dar una lectura falsa, por encima o por debajo de los valores adecuados en un test ELISA, o incluso dar una respuesta no lineal.
Incluso en algunos casos algunas enfermedades contribuyen a crear el efecto matriz alterando las propiedades de la sangre. Este efecto es difícil de predecir y de solucionar.
Por ello no solemos recomendar usar muestras de plasma o suero sin diluir, para evitar este efecto. El factor de dilución mínimo recomendado es 1/2, incluso para la detección de citoquinas poco abundantes como IL1 beta e IL6.
-También sugeriría incubar el anticuerpo por más tiempo. Al menos 2.5 horas, pero lo ideal es dejarlo actuar durante la noche para incrementar la señal.
Si te parece y estás de acuerdo te propongo ensayar los cambios sugeridos y observar si la señal aumenta. En caso contrario, ya que ambos kits están cubiertos por la garantía Abpromise, se te reemplazarían los kits o reembolsaría el importe de los mismos.
Espero que esta información sea útil. No dudes en contactarme para cualquier comentario que puedas tener al respecto.

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Answer

Gracias por mandarme los cuestionarios rellenos.

¿Podrías por favor confirmarme como se llevo a cabo la preparación de la solución de HRP Streptavidina?

Recientemente se han cambiado los protocolos de algunos de nuestros kits, y antes la solución de Streptavidina-HRP estaba diluida 1000x, mientras que en la nueva versión se ha concentrado a 200X.

Si se hubiera llevado a cabo una preparación de la solución teniendo en cuenta la dilución 1/1000 esto explicaría por qué los resultados de absorbancia son tan bajos.

Si no fuera esta la causa, trataremos de encontrar otra solución en la mayor brevedad posible.

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Answer

Gracias por contactarnos.

Vuelvo a pediros disculpas por las molestias causadas, y siento mucho que estos kits no hayan dado el resultado esperado.

Para poder investigar este caso, evitar que vuelva a repetirse, y desde luego estar seguros que los kits que os mandemos a modo de reemplazo están en perfectas condiciones, te agradecería que mandaras mas detalles de los resultados obtenidos.

Te pediría por favor que me reenviaras el cuestionario adjunto relleno, con cuantos más detalles mejor acerca del almacenamiento del kit, y cualquier observación que hayáis podido hacer que os haya llamado la atención al realizar el ensayo (como cambios de color).

Te agradezco también que me envíes los valores obtenidos para poder comentarlos con mis compañeros del laboratorio, y así analizar la procedencia del fallo del kit.

Agradezco mucho tu comprensión, y confío en que este problema no vuelva a repetirse en el futuro.

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Answer

Thank you for your enquiry and your interest.

This kit is in stock and if you place the order today, we could deliver it by Friday the 28th September. The unit price is €490.00. I would advise you to read the datasheet as well as the on-line Protocol Booklet carefully to make sure that this productsuitsyour need.

https://www.abcam.com/ps/products/100/ab100772/documents/ab100772-IL6-Rat-ELISA-Kit-ab100772-protocol-plain-v2.pdf

Ifyou need any further assistance in the future, please do not hesitate to contact me.

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1-10 of 16 Abreviews or Q&A

Please note: All products are "FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES"
For licensing inquiries, please contact partnerships@abcam.com

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