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その他のビデオ・プロトコールは、こちらのビデオ・プロトコール・ライブラリーをご覧ください。
氷の入った容器
ガラス製の顕微鏡用スライド
ミクロトームと刃
オーブン
切片作製前にパラフィン包埋組織ブロックを氷上で冷やす。冷たいワックスは、組織標本内の硬い要素を支えることで、より薄い切片を得ることが可能になります。また、氷が溶けて少量の水分がブロックに浸透すると、組織を切断しやすくなります。
ウォーターバスに超純水を入れ、40~45℃に加熱する。
刃をホルダーにセットし、固定されたことを確認し、逃げ角(クリアランスアングル)を設定する。逃げ角は、ナイフの刃面とブロックの面との接触を防ぐものです。逃げ角の設定方法は、ミクロトームメーカーの説明書に従ってください。ライカの刃の場合、通常は1~5°の間です(図1)。
パラフィンブロックを挿入し、刃がブロックをまっすぐ横切るように向きを揃える。
慎重に刃をブロックに近づけ、数カ所薄く切り、位置が正しいことを確認する。必要であれば調整する。
ブロックをトリミングし、代表的な切片を切ることができる状態まで組織表面を露出させる。トリミングは通常10~30 µmの厚さで行う。
約4~5 µmの厚さで切片を切出す(最初の数切片はトリミングによる穴がある可能性が高いので、おそらく廃棄する必要があります)。
ピンセットを使って、リボン状の切片をつまみ、ウォーターバスの水面に浮かべて、平らにする。ピンセットで切片を切り離す。
顕微鏡用スライドを使って水槽から切片を取り出し、スライドラックに立てて保管する。
スライドラックをオーブンに入れ、切片を37℃で一晩、乾燥させる。