マウス組織をマウス抗体で染色する
マウス組織をマウス抗体で染色する際に、バックグラウンドを低減させる方法をご説明します。
マウス組織をサンプルとし、マウス・モノクローナル抗体を一次抗体として使用して免疫組織染色を行うと、バックグランドが高くなることがあります。このバックグランドは、二次抗体がマウス組織に内在するマウス・イムノグロブリンに反応することが原因です。
この現象を回避するためには、以下のような方法があります。
1. 一次抗体はマウス由来ではないものを選択する。
マウス由来ではないモノクローナル抗体としては、ウサギ･モノクローナル抗体 RabMab をお勧めします。
2. 二次抗体を使用せず、直接標識一次抗体を使用する。
アブカムは直接標識一次抗体を多数ラインアップしています。こちらをご覧ください。直接標識一次抗体が市販されていない場合には、Abcam Antibody Conjugation Kits などの標識キットをご利用ください。
3. バックグラウンドを低下させるキット製品を使用する。
Mouse on Mouse Polymer IHC Kit をお勧めします。
4. 内在性イムノグロブリンをブロッキングする。
下記のプロトコールをご参照ください。
内在性イムノグロブリンのブロッキング
- 組織切片を通常どおり調製する。
- 二次抗体と同じ動物種由来の血清によるブロッキングを、30 分行った後、PBS-T（Tween20/PBS）または TBS-T（Tween20/TBS）で2 分間の洗浄を 3 回行う。
- Fab フラグメントの抗マウス・イムノグロブリン抗体（Goat Fab Anti-Mouse IgG H+L（ab6668）など）を、室温で 1 時間、または 4 ℃ で一晩反応させる。濃度は 0.1 mg/ml を基本とするが、サンプルごとに最適な濃度を検討することが望ましい。
- 洗浄し、通常の免疫組織染色のステップに進む。