Anti-PDE7A/HCP1 抗体 (ab14616)

Merci beaucoup pour votre réponse.
Merci pour l'image avec le résultat sur le muscle squelettique. Je vais faire suite à ces deux bandes aspécifiques avec le laboratoire.
Je peux aussi vous conseiller de soumettre une Abreview avec ces résultats. Une Abreview c'est un court feedback des utilisateurs de nos produits sur la fiche technique. Ainsi les autres chercheurs connaissent votre expérience avec ce produit et vous recevrez des points qui peuvent être échangées contre des remises/bon Amazon. www.abcam.com/Abreviews
Malheureusement nous n'avons pas un autre anticorps contre le PDEA7 pour double vérifier les bandes. Si par contre sur des autres échantillons vous recevez les bandes de taille attendu, c'est une très bonne indication que les bandes dans les cellules endothéliales soient des isoformes. Veuillez nous tenir au courant si nous pourrions vous assister autrement aussi. Je vais volontiers vous envoyer un échantillon d'un marquer de taille. En regardant, je trouve que le ab116028 est éventuellement mieux. Veuillez me confirmer quel marquer de taille vous préférez. https://www.abcam.com/index.html?pageconfig=resource&rid=13449&source=pagetrap&viapagetrap=prismproteinladders
Je me réjouis de votre réponse

Merci de votre patience. Comme xx est absent cette semaine, je vais suivre et essayer de résoudre ce problème avec le ab14616.

Le laboratoire nous a confirmé qu'ils volent une bande très faible aux au-dessus des 100kD. Cette bande est en rien comparable à la votre en intensité. Ils vont essayer de la quantifier et nous envoyer.

Comme la qualité de nos produits est très importante pour nous, j'aimera bien vous proposer encore deux modifications techniques. Si celles-ci ne permettent pas non plus à résoudre le problème, je suggère de vous envoyer un remplacement d'un nouveau lot ou de procéder au remboursement.

1.) Est-ce que les échantillons ont bien été réduits et dénaturées? Je peux conseiller d'utiliser des échantillons bien réduits et dénaturés (avec bME ou DTT et en chauffant pour 10 minutes à 95°C).

2.) Effectivement la bande obtenu peux varier en fonction du marquer et le tampon. Pour illustration je peux vous recommander de regarder l'image d'un marquer de taille de nous: https://www.abcam.com/Prism-Protein-Ladder-10-175-kDa-ab115832.htmlComme je n'ai pas trouvé les isoformes trouvées dans les cellules endothéliales, je vous propose d'utiliser un contrôle positif pour vérifier que les trois bandes sont bien les trois isoformes. Si vous n'avez pas des lysats de tissus comme le cœur ou cerveau humain, je peux vous conseiller aussi de prendre par exemple des cellules Jurkat ou autres cellules immunitaires. Dans la publication suivante se trouvent des belles images de détection de PDE7A dans différents cellules immunitaires. http://ajplung.physiology.org/content/284/2/L279.full

Pourriez vous me confirmer quel type de cellules endothéliales vous utilisez, c'est une lignée ou des HUVEC par exemple?

Veuillez ne pas hésiter à me contacter si vous avez des questions. Si vous avez déjà discuté le points ci-dessus au téléphone avec xx je m'excuse. Veuillez me le faire savoir s'il vous plaît.

J'espère que ces suggestions vont résoudre le problème. Je me réjouis d'avoir de vos nouvelles.

Merci pour ces précisions et pour l'image que je vais immédiatement transmettre au laboratoire qui produit cet anticorps. Les 3 bandes observées autour des 55 kDa pourraient correspondre aux 3 isoformes de la PDE7A comme décrit sur SwissProt : http://www.uniprot.org/uniprot/Q13946 . Malheureusement, il y a ces deuxbandes autour des 110 / 120 kDa dont l'intensité suggère une non-spécificité de l'anticorps que nousvous avons fourni. L'image qui m'a été envoyée et qui a été ajoutéeà la fiche technique ne montre malheureusement pas ce qui est obtenu au-dessus de 98 kDa. Je vais donc demander au laboratoire de me fournir le blot entier et plus d'explications quant à la possible détection de bandes à 110/120 kDa.. Je suis vraiment désolé que ce produit ne fonctionne pas comme attendu. Je suis également désolé de ne pas pouvoir trouver une solution immédiateà ce problème et j'espère quenous serons en mesure de vous fournir un anticorps anti-PDE7A de qualité le plus rapidement possible. Je serai en déplacement toute la semaine prochaine mais ma collègue Claudia Zimmerlisuivra votre dossier et vous contactera dès que nous aurons reçu une réponse du laboratoire. Merci pourvotre patience et votre coopération.

Comme convenu par téléphone j'ai procédé à l'envoi d'une unité de ab14616 lot GR59978. Le numéro de commande de remplacement gratuit de ce produitest *******. Vous recevrez prochainement un mail de confirmation comprenant les détails d'expédition. Votre commande originale concernait 2 unités. Je procéderai, si vous le souhaitez,à l'envoi ultérieur d'une seconde unité (il nous en reste une à notre bureau des Etats-Unis) ou à un remboursement totale de la commande si le produit ne fonctionne toujours pas.

Le laboratoire où est produit l'anti-PDE7A ab14616 m'a informé qu'un bon contrôle positif sont le rein et le coeur. Le blot obtenu avec cet anticorps est en pièce jointe. Est-ce que l'utilisation de BSA comme agent bloquant vous a permis d'améliorer vos résultats? J'espère que ces informations vous seront utiles. N'hésitez pas à nous contacter de nouveau si vous avez d'autres questions.

Thank you for your enquiry. I have contacted the originator of these products and I have obtained the following information. These products are shipped in a commercially sensitive formulated antibody stabilization buffer containing hepes, phosphate buffers, pH7.4, cryo-protective agents, stabilizing proteins and preservatives (sodium azide). I hope this information helps, please do not hesitate to contact us if you need any more advice or information.