SimpleStep ELISA®キット
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高感度ELISAが、洗浄1回、アッセイ時間90分で性能を損なうことなく実施できます。
- 洗浄1回、簡単なプロトコールにより、アッセイ時間を90分以内に短縮
- 高品質抗体の使用により、高い感度、特異性、再現性を実現
- 生体サンプルですべて検証済み
- 96ウェルプレート形式、12 × 8ウェルに分離可能
- 10 個入りパックおよび 384 ウェルフォーマットが利用可能
目次
- SimpleStep ELISA®とは？
- SimpleStep ELISA®の仕組み
- SimpleStep ELISA®キットにリコンビナント抗体を使用する理由
- 高い感度を実現
- 国際標準でキャリブレーション済み
- ハイスループットスクリーニング（HTS）とSimpleStep ELISA®
- SimpleStep ELISAとSPECTROstar®Nano
- SimpleStep ELISAキットとPHERAstar FSX
- 分析対象
SimpleStep ELISA®とは？
SimpleStep ELISA®の仕組み
SimpleStep ELISA とは
SimpleStep ELISA® とはアブカムが開発した、操作がシンプルで時間が短く、そして特異性も感度も高いという、理想的とも言えるサンドイッチ ELISA キットです。
あなたの ELISA をアップグレードできます
| これまでの ELISA キット | SimpleStep ELISA® キット | ||
| 感度 | ●● | ●●●● | プレート表面ではなく、液中での反応システムであるため、より高い感度に |
| 再現性 | ●● | ●●●● | キットには、リコンビナント抗体が採用されており、抜群の再現性を実現 |
| フル・バリデーション | ● | ●●●● | 様々なタイプの生物サンプルでテストされており、内在性タンパク質へ反応が確実 |
| 簡単なプロトコールとアッセイ時間の短さ | ●●●● | 洗浄は1回のみ、アッセイ時間は90分間 |
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SimpleStep ELISA はどのようにワークするのか?
通常のサンドイッチ ELISA キットはマルチ・ステップであり、まずウェルにサンプルを加えて一次反応を行い、洗浄後標識抗体を加えて二次反応を行い、それから発色・検出を行います（アビジン－ビオチン反応を利用した三次反応が必要なキットもあります）。これに対しシングル・ステップである SimpleStep ELISA キットでは、ウェルにサンプルと標識抗体などの試薬を同時に加えて一回反応を行うだけです。洗浄後すぐに発色・検出の操作に移ります。
マルチ・ステップのサンドイッチ ELISA で形成される「サンドイッチ」は、固相抗体：ターゲット物質：酵素標識抗体です。一方 SimpleStep ELISA キットで形成される「サンドイッチ」は、エピトープ・タグ標識抗体：ターゲット物質：酵素標識抗体です。ウェルにはエピトープ・タグに対する抗体が固相化されており、その固相抗体がエピトープ・タグを介して形成されたサンドイッチを捕捉します。このサンドイッチ形成とウェルへの捕捉を 1 回の反応で行っているわけです（図 1）。
図1. SimpleStep ELISA®キットでは、ターゲット-捕捉抗体と検出抗体のサンドイッチ複合体が溶液中に形成され、このサンドイッチペアは捕捉抗体に結合したアフィニティータグを介してマイクロプレートに結合します。SimpleStep ELISAの仕組みについて、ビデオをご覧ください。
従来のサンドイッチELISAでは、ターゲット・タンパク質の少なくとも2つの異なる部位に結合する抗体ペアを使用します。捕捉抗体はマイクロプレートのウェルにあらかじめコーティングされ、ターゲット・タンパク質に選択的に結合します。洗浄後、検出抗体を添加します。検出抗体はターゲット・タンパク質の別の（2つ目の）部位に結合し、サンドイッチ複合体を形成します。
SimpleStep ELISAキットでは、このプロセスにCaptSure™システム（洗浄1回で抗体-ターゲットのサンドイッチ複合体を形成させるセミホモジニアスなシステム）を使用しています。わずか1回のインキュベーションと洗浄ステップで、完全なサンドイッチ複合体をウェル内に形成し、免疫親和性タグによりプレートに固相化します（図1）。
ELISAのアップグレード
SimpleStep ELISA®の特長 | 利点 |
リコンビナント抗体による高い感度、再現性、特異性 | 最初の実験から一貫して信頼できる結果 |
生体サンプルで検証済み | 内在性タンパク質との確かな反応 |
洗浄1回、迅速（90分）で標準化されたプロトコール | SimpleStep ELISA®の全キットにわたり迅速かつ簡易なプロトコールのため、エラーのリスクを低減 |
96ウェルプレート形式、12 × 8ウェルに分離可能 | 残った試薬は使い回せるため、無駄がない 1つのキットで小規模の複数の実験が可能 |
10パックサイズが利用可能 | 同一ロットでの提供を保証 |
競合SimpleStep ELISA®
競合SimpleStep ELISA®キットは、サンドイッチSimpleStep ELISAキットと同様のスピードとシンプルさを兼ね備えたキットです。プロトコールのステップ数が少なく、アッセイ時間は90分です。
サンドイッチELISA®では1つのエピトープしか認識できませんが、競合SimpleStep ELISA®キットを使用することで、サンドイッチELISA®では測定できない低分子やホルモンを検出することができます。
アブカムの競合SimpleStep ELISA®キットではアフィニティータグを使用しており、このタグをSimpleStep ELISA®プレートに固相化されたモノクローナル抗体が認識します。この競合ELISA®では、抗原抗体複合体をワンステップで形成できるため、アッセイ時間を大幅に短縮することができます。
抗原ダウンフォーマットでは、CaptSure™アフィニティータグ付き抗原とサンプル中の非標識抗原が競合してHRP標識済み捕捉抗体に結合します。抗体ダウンフォーマットでは、HRP標識済み抗原とサンプル中の非標識抗原が競合してCaptSure™アフィニティータグ付き捕捉抗体に結合します。CaptSure™アフィニティータグ付きの抗原または抗体は、SimpleStep ELISA®プレートに結合します。標識済み抗原のみを添加したアッセイウェルと比べてシグナルが減少した場合、サンプル中に抗原が存在することを示します。
SimpleStep ELISA®キットにリコンビナント抗体を使用する理由
ELISAでは抗体を用いてターゲット抗原を検出するため、使用する抗体の特異性は高くなければなりません。
- 高い一貫性と再現性
- 高い感度と検証済みの特異性
- 容易なスケールアップと供給保証
SimpleStep ELISA®では、可能な限りリコンビナント・モノクローナル抗体を使用しています。つまり、最初の実験から信頼できる、再現性のある結果が得られます。
これらのマッチド抗体ペアは、血漿や血清などの生理学的に重要なサンプルでの使用に最適化されています。また、キャリアフリーやそのまま標識可能な製品も利用できるほか、個別の捕捉抗体や検出抗体としても使用できます。このため、ワークフロー全体を通して柔軟性と一貫性を確保できます。
高い感度を実現
SimpleStep ELISA®キットは、性能を損なうことなくアッセイ時間を大幅に短縮します。75種類の一般的なヒトおよびマウスのタンパク質について、SimpleStep ELISA®キットと他社のELISAキットの感度を比較しました。SimpleStep ELISA®は、75種類中56種類で優れた感度を示しました（図2）。
図2. 75種類の一般的なターゲット・タンパク質について、SimpleStep ELISA®キットと他社のキットの感度を比較し、感度の違いを算出しました。SimpleStep ELISA®は、他社のELISAキットと比較して、平均して高い感度を示しました。
国際標準でキャリブレーション済み
血清や血漿中の分泌型タンパク質についてはすべてのターゲットについて、WHO（世界保健機関）の血液検査の参考基準値に入ることを確認しています。また、可能な限りNIBSC（国立生物学的製剤研究所）の国際標準品をSimpleStep ELISA®キットで測定し、データの比較のための換算係数を公表しています。
国際標準でキャリブレーションすることにより、異なるキットで得られたデータセットでも比較することができます。さらに、すべてのSimpleStep ELISA®キットは、複数の生体サンプルを用いてアッセイの特異性を検証済みです。
SimpleStep ELISA®キットのNIBSC換算係数の例
製品 | AbID | 標準ID | NIBSC換算係数 |
ヒトエリスロポエチン（EPO） | ab274397 | 11/170 | 0.001 |
ヒトα1-アンチトリプシン（SERPINA1） | ab189579 | 05/162 | 0.3649 |
ヒトBMP2 | ab277085 | 93/574 | 0.00024 |
ヒトC-ペプチド | ab260064 | 13/146 | 1.077 |
ヒトFlt-3リガンド | ab254507 | 96/532 | 0.0014Tabl |
ハイスループットスクリーニング（HTS）とSimpleStep ELISA®
アブカムのHTS用ツールと試薬は、スクリーニングのたびに、迅速かつ再現性・信頼性のある結果が得られるよう特別に開発されています。SimpleStep ELISA®キットはすべて、384ウェルSimpleStep ELISA®マイクロプレートを使用することで384ウェルプレート形式に適応できます。これらのコーティング済みプレートは自動分注機用に設計され、多くの標準的なプレートリーダーで使用できるなど柔軟性があるため、研究のスケールアップに役立ちます。
384ウェルの当社のSimpleStep ELISA®キットを使用することで、同じ90分間で従来のELISA法よりも4倍のサンプル数を処理できます。
90分で測定できる384ウェルSimpleStep ELISA®キットも販売を開始し、ラインナップ拡大中です。384ウェルSimpleStep ELISA®マイクロプレートと384ウェルSimpleStep ELISA®キットは、標準キットと同様の迅速でシンプルな洗浄1回のプロトコールを使用しています。ただし、必要なサンプル量は少なく、96ウェルキットで必要な量のわずか4分の1です。
ELISAベースのハイスループットスクリーニング・ソリューションの詳細については、こちらをご覧ください。
SimpleStep ELISA®キットとSPECTROstar®Nano
SimpleStep ELISA®キットから最良の結果を得るには、SPECTROstar®Nanoプレートリーダーの使用をおすすめします。SPECTROstar®Nanoを使用することで、良好なデータ品質が得られると同時に、MARSデータ解析テンプレートと簡便にリンクできるため、迅速で正確な結果が得られます。
SPECTROstar®NanoとSimpleStep ELISA®キットを組み合わせた使用については、本パッケージの3つのアプリケーションノートをご覧ください。
アプリケーションノート1：アッセイ時間90分の高感度ELISA：SimpleStep ELISA® キットとSPECTROstar® Nano
どのように実現されるかご覧ください。
- SimpleStep ELISA®の洗浄1回のプロトコールでは、アッセイ時間を短縮しながら、高い感度、特異性、再現性を維持
- SPECTROstar®NanoとMARSデータリダクションソフトウェアの使用により、アッセイにおける検出・解析が簡略化
アプリケーションノート2：SimpleStep ELISA®キットとSPECTROstar®Nanoを用いた高感度かつ迅速なオンコロジーバイオマーカーの測定
その理由をご覧ください。
- バイオマーカー発現の特定は、がん免疫療法の最適化に不可欠
- SimpleStep ELISA®キットは、数百種類ものがん関連マーカーを検出するツールを提供
- SPECTROstar®Nanoによりデータ収集がシンプルになり、MARSデータ解析を使用することで結果を迅速に取得
アプリケーションノート3：SimpleStep ELISA®キットとSPECTROstar®Nano によるアルツハイマー病のターゲットの迅速かつ正確な検出
詳細をご覧ください。
- ニューロンのターゲット発現の評価が、アルツハイマー病研究に重要である理由
- 90分、洗浄1回のプロトコールのSimpleStep ELISA®キットにより、BDNF、タウ、TREM2を定量する方法
- SPECTROstar®Nanoを用いてアッセイを検出し、MARS解析ソフトウェアを用いて結果を自動で解析する方法
薬物動態試験や免疫療法薬の安全性試験において重要なヒトIgGとヒトIFN-γの2つのターゲットについて、384ウェルフォーマットのSimpleStep ELISA®とPHERAstar® FSXを連携させた定量方法の詳細をご覧いただけます。
免疫応答の一部として細胞シグナル伝達に関与するタンパク質キナーゼIRAK4の検出に、アブカムのマッチド抗体ペア・キットを384ウェル時間分解蛍光法（TRF）イムノアッセイに使用し、PHERAstar® FSXで読み取る方法をご覧いただけます。
分析対象
現在、ほぼ700種類のターゲットに対するSimpleStep ELISA®キットを販売しております。これにはPD-L1、GFP、フィブリノゲンといった一般的なタンパク質が含まれます。ラインナップ拡大中です。
最も一般的なELISAターゲットトップ10に対応するSimpleStep ELISA®キット：
ターゲット | ヒト | マウス | ラット |
IgG* | |||
アルブミン | |||
TNF-α | |||
IL-6 | |||
IFN-γ | |||
IL-1β | |||
α1-アンチトリプシン | |||
プロコラーゲンIα | |||
フィブリノゲン | |||
* ウサギ、ハムスター、イヌ、モルモットのサンプルも利用可能
** アカゲザルとも反応
*** 複数の種に対応
ELISAガイドブック