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Multiplex cellular microRNA profiling using Firefly™ technology: a technical overview and cross-cytometer comparison

FireflyTM テクノロジー : フローサイトメーターを使用する新しいマイクロ RNA プロファイリング・アッセイ

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最大 68 種類のターゲット・マイクロ RNA について、多数のサンプルを同時に解析できるハイスループットのアッセイ系です。標準的なフローサイトメーターを用いるため機器の制限が小さい上、感度はアトモル(10-18mol)以下、ダイナミックレンジは 5 log 近く、再現性(バラツキ)は CV 5% 未満と、優れたパフォーマンスを示します。

アッセイの流れ

下図をご参照ください。ターゲット・マイクロ RNA のハイブリダイズ、標識などの反応は、筒状の微小パーティクル上で行います。反応容器は一般的な 96-well フィルター・プレートを用い、検出は標準的なフローサイトメーターで行います。得られたデータは専用のソフトウェアを用いて解析します。


測定の例

Has-mir-206 など 5 種類のターゲット・マイクロ RNAを、BD 社、Miltenyi 社、Millipore 社の一般的な 3 種類のフローサイトメーターで検出しました。上の表は検出感度を、下の表は再現性を示します。いずれのターゲット・マイクロ RNA においても、感度はアトモル・レベルでした。CV 値はアトモル・レベルであれはいずれも 5 % 以下で、バラツキが小さいことがわかります。

技術の概要と性能の詳細

こちらをご覧ください。

参考文献

  • Chapin SC, Pregibon DC and Doyle PS (2011). Rapid microRNA profiling on encoded gel microparticles. Angew Chem Int Ed, 50, 2289-93.
  • Chapin SC, Pregibon DC and Doyle PS (2009). High-throughput flow alignment of barcoded hydrogel microparticles. Lab Chip, 9, 3100-9.
  • Dendukuri D, Pregibon DC, Collins J, Hatton TA and Doyle PS (2006). Continuous flow lithography for high-throughput microparticle synthesis. Nat Mater, 5, 365-9.
  • Pregibon DC and Doyle PS (2009). Optimization of encoded hydrogel particles for nucleic acid quantification. Anal Chem, 81, 4873-81.
  • Prefibon DC, Toner M and Doyle PS (2007). Multifunctional encoded particles for high-throughput biomolecule analysis. Science​, 315, 1393-96.
登録