メンブレン抗体アレイ
タンパク質発現のプロファイリングに
メンブレン抗体アレイは、1 枚のメンブレン上でサンドイッチ ELISA 様の反応を行わせることにより、手軽に複数のタンパク質発現を同時に検出することができる便利なキットです。
ア ブカムのメンブレン抗体アレイには血管新生 Angiogenesis、サイトカイン Cytokine、アポトーシス Apoptosis などの分野のキットがあり、各キットのメンブレンにはその分野に関わるタ－ゲット・タンパク質 （例：血管新生の場合 bFGF、TIMP-1、VEGF など 20 種類） に対する抗体が固相化されています。
プロトコールの概要はこちらをご覧ください （PDF 英文）。
培養上清や血清などのサンプル溶液中にメンブレンを浸してインキュベートし、洗浄後、酵素標識抗体ミックスとインキュベートします。洗浄後、酵素反 応 （呈色または化学発光） を行います。サンプル中にターゲットタンパク質が存在する場合、メンブレン上のスポットとして可視化されます。
ELISA および質量分析との比較
ELISA | 抗体アレイ | 質量分析 | |
|---|---|---|---|
| ターゲット | 既知 | 既知 | 未知 |
| 解析方法 | タンパク質の量 | タンパク質の量 | イオンの量 |
| 測定方法 | 抗原抗体反応 | 抗原抗体反応 | 原子への荷電性 |
| 測定可能種類 | 単一 | 複数 | 複数 ・ 同時 |
| 同時検出できるタンパク質の種類 | 1 | 500 | 1,000 |
| サンプルあたりのコスト | 低い | ELISAよりもさらに低い | 高い |
| 感度 | ナノモル ・ レベル | ピコモル ・ レベル | アトモル ・ レベル |
| 定量性 | あり | 半定量的 | なし |
| 測定サンプル量 | マイクロリットル ・ レベル | マイクロリットル ・ レベル | ごく少量 |
| プロトコールの煩雑さ | シンプル | シンプル | 複雑 |
| セットアップコスト | 低い | ELISAよりもさらに低い | 測定機器が高価 |
| 使いやすさ | 簡単 | 簡単 | 簡単とは言えない |
| 再現性 | 高い | 高い |
メンブレン抗体アレイの使用例
- 炎症性疾患患者の血清における、複数のサイトカインの発現プロファイリング
- 癌患者の血清における、複数のバイオマーカーの発現プロファイリング
- PCR、遺伝子マイクロアレイ、ウエスタン・ブロットなどの実験結果の確認
- 炎症による活性化タンパク質の変動の検出 （ぜんそくにおける炎症過程の追跡など）
- 健常人と患者、薬剤処理の前後など、異なる条件下のサンプルにおける複数のタンパク質の発現量比較