アブカムでは最適な動作のために Google Chrome など最新ブラウザでの閲覧を推奨します。

私たちはウェブサイトをできるだけ使いやすくするために、クッキーを使用しています。

クッキー・ポリシーでは、使用するクッキーをオプトアウトする方法について説明しています。

クッキーの設定を変更しないままでいる場合、このポリシーに同意しているとみなされます。

続ける 続ける

お問い合わせは電話 +81-(0)3-6231-0940 または メールでどうぞ

  • アカウント
  • ログアウト
ログイン または 新規登録

Welcome

ログイン または

すでにアカウントをお持ちですか?

新規登録
カート
クイック・オーダー
Abcam homepage

  • 研究用製品
    製品タイプ別
    一次抗体
    二次抗体
    イムノアッセイキット・試薬
    細胞・組織イメージング
    細胞・バイオケミカルアッセイ
    タンパク質・ペプチド
    製品タイプ別
    プロテオミクス
    アゴニスト・アクチベータ-・アンタゴニスト・インヒビター
    細胞株・ライゼート
    miRNA マルチプレックス・アッセイキット
    マルチプレックス・アッセイ
    研究分野別
    癌
    循環器系
    細胞生物学
    エピジェネティクス
    メタボリズム
    発生生物学
    研究分野別
    免疫学
    微生物学
    脳神経科学
    シグナル伝達
    ステムセル
  • 診断と治療のソリューション
    カスタム・ソリューション & パートナーシップ

    あなたの診断法や治療法を発展させるための、カスタム抗体開発およびコマーシャル・パートナーシップ

    私たちと共にカスタム・ソリューションを創造する

    私たちとパートナーになる

  • サポート
    サポートハブ

    研究のためのサポートとアドバイス

    サポートハブを表示

    プロトコール

    実験のステップごとの詳細

    プロトコールを表示

  • イベント
    • イベント・カレンダー
    • 癌
    • 循環器
    • エピジェネティクス&核内情報
    • 免疫学
    • ニューロサイエンス
    • ステムセル
    • 展示会
    • ウェビナー
    最新のイベント情報

    世界中でアブカムが主催する研究会やセミナーの日程、内容、演者など

    イベント・カレンダー

  • パスウェイ
    細胞シグナル伝達パスウェイ

    すべてのパスウェイを見る

    インタラクティブ・パスウェイを見る

  • ブログ
    アブカム・ブログ

    最新の情報はこちら.

    • キャンペーン
    • 製品情報
    • 技術情報

新型コロナウイルス (COVID-19)に伴う当社の対応について

製品:研究分野別
  • 癌
  • 循環器
  • 細胞生物学
  • エピジェネティクス&核内情報
  • 発生
  • 免疫学
  • 代謝関連
  • 感染症
  • ニューロサイエンス
  • シグナル伝達
  • ステムセル

Brain Synaptosomal Preparation

By Dr. Taylor Kimberly *

  1. Homogenize brain tissue. Add 5 ml of 0.32 M sucrose. Homogenize with 12 strokes of a 19x84mm tissue grinder (Potter Elvehjem, plastic coated) at 800 rpm.
  2. Centrifuge to remove large debris. Centrifuge for 10 min at 1000 g at RT.  Remove 100 ul for synaptophysin analysis.
  3. Layer supernatant onto sucrose and centrifuge again.
  4. Carefully layer the supernatant onto 4 ml of 1.2 M sucrose in a SW41 centrifuge tube (Beckman). 
  5. Spin at 160,000 g for 15 min (= 33,000 rpm with SW41 rotor).
  6. Carefully remove synaptosome layer. The synaptosomes are at the interface between the 1.2 M and 0.32 M sucrose layers. It is a slightly cloudy thin layer. Mitochondria and lysosomes pellet to the bottom. 
  7. Remove 100 ul for synaptophysin analysis.
  8. Dilute synaptosomes with 0.32 M sucrose. Add 4 ml of 0.32 M sucrose to synaptosomes, mix, and then carefully layer onto 4 ml of 0.8 M sucrose in a fresh centrifuge tube.
  9. Centrifuge to pellet synaptosomes.
  10. Spin at 160,000 g for 15 min. The pellet is enriched in synaptosomes.
  11. Discard the supernatant and resuspend in 1 ml of 1X STE. 
  12. Remove 50 ul for electron microscopy analysis.
  13. Lyse synaptosomes for immunoprecipitation analysis. Add 110 ul of 10% NP-40 STEN lysis (- BSA) and nutate at 4°C for 20 min. Protein normalize samples, remove sample for synaptophysin analysis then continue IP according to standard protocols.

Buffers

2.55 M sucrose (unbuffered)

  • Heat on a stirring block to dissolve, then bring up to 1 L.
  • Determine concentration using a refractometer and adjust to 2.55 M sucrose (refractive index is 1.4558 for 87.28% sucrose (w/v) at 2.5498 M)

10% NP-40 STEN lysis buffer (-BSA)

  • 5 ml 2x STEN
  • 1 ml NP-40
  • 0.1 ml 100X PI
  • 0.1 ml 100x Pefabloc
  • 3.8 ml ddH2O
  • Store at -20°C.

Note:

amyloid beta in brain -

if value = 20 pM

then 20 pmole/Liter = 20 pmole/1000g

so x 12 for dilution = 240 pmole/1000g = 0.24 pmol/g


Harvard Medical School/Brigham and Women's Hospital

技術情報や製品情報をメールで受け取る 登録
製品・研究分野別
  • 癌
  • 循環器
  • 細胞生物学
  • 発生
  • エピジェネティクス&核内情報
  • 免疫学
  • メタボリズム
  • 感染症
  • ニューロサイエンス
  • シグナル伝達
  • ステムセル
製品・タイプ別
  • 一次抗体
  • 二次抗体
  • バイオケミカルズ
  • アイソタイプ・コントロール
  • マルチカラー・セレクター
  • キット
  • ローディング・コントロール
  • ライゼート
  • ペプチド
  • タンパク質
  • スライド
  • タグ抗体・細胞マーカー
  • その他試薬
サービス&サポート
  • サポート
  • よくあるお問い合わせ
  • プロトコール&トラブルシュート
  • ご購入に関して
  • お問い合わせフォーム
  • トレーニング
アブカムについて
  • 企業ウェブサイト
  • 投資家の皆様へ
  • 企業情報
  • 採用情報
  • アブカムについて
イベント
  • 展示会
  • カンファレンス
ブログ

ブログを読む

International websites
  • abcam.com
  • abcam.cn

Join with us

  • LinkedIn
  • facebook
  • Twitter
  • YouTube
  • Terms of sale
  • Website terms of use
  • Cookie policy
  • Privacy policy
  • Legal
© 1998-2021 Abcam plc. All rights reserved.