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蛍光ウエスタン・ブロッティングと Alexa Fluor 標識抗体

蛍光ウエスタン・ブロッティングとは

ウエスタン・ブロッティングの検出系に蛍光を用いた手法で、二次抗体に蛍光標識抗体を使用します。次のような特長があります。

  • 広く用いられている化学発光法で必要となる発光の操作やフィルムが必要ありません。
  • 蛍光ウエスタン・ブロットは化学発光法や HRP による発色法よりも定量性に優れています。発生、分化、細胞周期などの過程におけるタンパク質発現量の変動、リン酸化などのタンパク質修飾の変化といった、ウエスタン・ブロッティングを用いた定量的な解析に有用です。
  • 異なるターゲットに対する一次抗体と異なる色の蛍光標識二次抗体を組み合わせることにより、マルチカラー解析を簡単に行うことができます。この解析は比較する二つのタンパク質の分子量が近い場合であっても可能です。
  • 化学発光よりもシャープなバンドが得られます。

Alexa Fluor® 標識抗体

バックグラウンドの低さと蛍光強度の強さに優れた蛍光色素 Alexa Fluor® 標識抗体は、もちろん蛍光ウエスタン・ブロッティングに用いる二次抗体として使用できます。特に 680 と 790 がお勧めです。Alexa Fluor® について詳しくは Alexa Fluor® ポータルのページをご参照ください。

Alexa Fluor® 680 および 790 標識二次抗体を用いたマルチカラー解析

サンプル:HeLa 細胞ライゼート
レーン 1:25μg 2:20μg 3:15μg 4:10μg 5:5μg
バンド赤:抗 Tubulin (ab18251) +
Alexa Fluor® 680 標識抗 Rabbit IgG (ab175773
バンド緑:抗 GAPDH (ab83956) +
Alexa Fluor® 790 標識抗 Chicken IgG (ab175787

蛍光スペクトル


蛍光色素

励起波長

蛍光波長

モル吸光
係数*

量子収率**

680679702184,0000.36
790784814270,000-
* Efficiency of excitation light absorption. The higher the excitation coefficient the higher the likelihood of light absorption in a certain wavelength region.
** Ratio of number of photons emitted to the number of photons absorbed ? also known as yield of emitted light. The closer to 1 the quantum yield of a fluorochrome is the more efficient is the fluorescence process.

Alexa Fluor® 680 製品一覧

製品名モノポリ交差種アプリケーション製品番号
Anti-Rabbit IgG H&LDonkey-PolyRabbitFlow Cyt, IHC-P, ELISA, ICC/IF, WBab175772
Anti-Rabbit IgG H&LGoat-PolyRabbitELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175773
Anti-Mouse IgG H&LDonkey-PolyMouseWB, ICC/IF, Flow Cyt, IHC-P, ELISAab175774
Anti-Mouse IgG H&LGoat-PolyMouseELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175775
Anti-Goat IgG H&LDonkey-PolyGoatWB, ELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-Pab175776
Anti-Rat IgG H&L (preadsorbed)Donkey-PolyRatFlow Cyt, IHC-P, ELISA, ICC/IF, WBab175777
Anti-Rat IgG H&LGoat-PolyRatELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175778
Anti-Chicken IgY H&LGoat-PolyChickenELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175779
Anti-Rabbit IgG H&L (preadsorbed)Donkey-PolyRabbitIHC-Fr, ICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WBab186692
Anti-Mouse IgG H&L (preadsorbed)Goat-PolyMouseICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WB, IHC-Frab186694
Anti-Rabbit IgG H&L (preadsorbed)Goat-PolyRabbitICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WB, IHC-Frab186696
Anti-Mouse IgG H&L (preadsorbed)Donkey-PolyMouseICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WB, IHC-Frab186698
Anti-Mouse IgG H&L (preadsorbed)Rabbit-PolyMouseIHC-P, ICC/IF, Flow Cyt, ELISA, IHC-Fr, WBab186701

Alexa Fluor® 790 製品一覧

製品名モノポリ交差種アプリケーション製品番号
Anti-Rabbit IgG H&LDonkey-PolyRabbitELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175780
Anti-Rabbit IgG H&LGoat-PolyRabbitELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175781
Anti-Mouse IgG H&LDonkey-PolyMouseELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175782
Anti-Mouse IgG H&LGoat-PolyMouseELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175783
Anti-Goat IgG H&LDonkey-PolyGoatWB, Flow Cyt, IHC-P, ELISA, ICC/IFab175784
Anti-Rat IgG H&LDonkey-PolyRatELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175785
Anti-Rat IgG H&LGoat-PolyRatELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175786
Anti-Chicken IgY H&LGoat-PolyChickenWB, IHC-P, ELISA, ICC/IF, Flow Cytab175787
Anti-Rabbit IgG H&L (preadsorbed)Donkey-PolyRabbitICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WB, IHC-Frab186693
Anti-Mouse IgG H&L (preadsorbed)Goat-PolyMouseICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WB, IHC-Frab186695
Anti-Rabbit IgG H&L (preadsorbed)Goat-PolyRabbitIHC-Fr, ICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WBab186697
Anti-Mouse IgG H&L (preadsorbed)Donkey-PolyMouseIHC-Fr, ICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WBab186699
Anti-Mouse IgG H&L (preadsorbed)Rabbit-PolyMouseICC/IF, ELISA, WB, IHC-P, Flow Cytab186702

Webinar

下の画像の中央をクリックすると Webinar (ウェブを使ったセミナー) がスタートします。言語は日本語で時間は約 15 分です。

  • 概要: 蛍光法の操作の流れ / 蛍光法の利点
  • 応用: 蛍光法のコツ / 蛍光法多重染色のコツ / 検出機器 / よくある質問 FAQ
  • 製品: Alexa Fluor® 標識二次抗体 / 抗体標識キット / 蛍光ウェスタン・ブロット・キット

検出機器

上記 Webinar で述べられています。ご参照ください。

関連リンク


二次抗体ポータル

Alexa Fluor ポータル

Alexa Fluor 標識
二次抗体 FAQ

Fluorochrome chart
-a complete guide


Alexa Fluor® is a registered trademark of Life Technologies. Alexa Fluor® dye conjugates contain(s) technology licensed to Abcam by Life Technologies.

蛍光ウエスタン・ブロッティングとは

ウエスタン・ブロッティングの検出系に蛍光を用いた手法で、二次抗体に蛍光標識抗体を使用します。次のような特長があります。

  • 広く用いられている化学発光法で必要となる発光の操作やフィルムが必要ありません。
  • 蛍光ウエスタン・ブロットは化学発光法や HRP による発色法よりも定量性に優れています。発生、分化、細胞周期などの過程におけるタンパク質発現量の変動、リン酸化などのタンパク質修飾の変化といった、ウエスタン・ブロッティングを用いた定量的な解析に有用です。
  • 異なるターゲットに対する一次抗体と異なる色の蛍光標識二次抗体を組み合わせることにより、マルチカラー解析を簡単に行うことができます。この解析は比較する二つのタンパク質の分子量が近い場合であっても可能です。
  • 化学発光よりもシャープなバンドが得られます。

Alexa Fluor® 標識抗体

バックグラウンドの低さと蛍光強度の強さに優れた蛍光色素 Alexa Fluor® 標識抗体は、もちろん蛍光ウエスタン・ブロッティングに用いる二次抗体として使用できます。特に 680 と 790 がお勧めです。Alexa Fluor® について詳しくは Alexa Fluor® ポータルのページをご参照ください。

Alexa Fluor® 680 および 790 標識二次抗体を用いたマルチカラー解析

サンプル:HeLa 細胞ライゼート
レーン 1:25μg 2:20μg 3:15μg 4:10μg 5:5μg
バンド赤:抗 Tubulin (ab18251) +
Alexa Fluor® 680 標識抗 Rabbit IgG (ab175773
バンド緑:抗 GAPDH (ab83956) +
Alexa Fluor® 790 標識抗 Chicken IgG (ab175787

蛍光スペクトル


蛍光色素

励起波長

蛍光波長

モル吸光
係数*

量子収率**

680679702184,0000.36
790784814270,000-
* Efficiency of excitation light absorption. The higher the excitation coefficient the higher the likelihood of light absorption in a certain wavelength region.
** Ratio of number of photons emitted to the number of photons absorbed ? also known as yield of emitted light. The closer to 1 the quantum yield of a fluorochrome is the more efficient is the fluorescence process.

Alexa Fluor® 680 製品一覧

製品名モノポリ交差種アプリケーション製品番号
Anti-Rabbit IgG H&LDonkey-PolyRabbitFlow Cyt, IHC-P, ELISA, ICC/IF, WBab175772
Anti-Rabbit IgG H&LGoat-PolyRabbitELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175773
Anti-Mouse IgG H&LDonkey-PolyMouseWB, ICC/IF, Flow Cyt, IHC-P, ELISAab175774
Anti-Mouse IgG H&LGoat-PolyMouseELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175775
Anti-Goat IgG H&LDonkey-PolyGoatWB, ELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-Pab175776
Anti-Rat IgG H&L (preadsorbed)Donkey-PolyRatFlow Cyt, IHC-P, ELISA, ICC/IF, WBab175777
Anti-Rat IgG H&LGoat-PolyRatELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175778
Anti-Chicken IgY H&LGoat-PolyChickenELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175779
Anti-Rabbit IgG H&L (preadsorbed)Donkey-PolyRabbitIHC-Fr, ICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WBab186692
Anti-Mouse IgG H&L (preadsorbed)Goat-PolyMouseICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WB, IHC-Frab186694
Anti-Rabbit IgG H&L (preadsorbed)Goat-PolyRabbitICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WB, IHC-Frab186696
Anti-Mouse IgG H&L (preadsorbed)Donkey-PolyMouseICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WB, IHC-Frab186698
Anti-Mouse IgG H&L (preadsorbed)Rabbit-PolyMouseIHC-P, ICC/IF, Flow Cyt, ELISA, IHC-Fr, WBab186701

Alexa Fluor® 790 製品一覧

製品名モノポリ交差種アプリケーション製品番号
Anti-Rabbit IgG H&LDonkey-PolyRabbitELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175780
Anti-Rabbit IgG H&LGoat-PolyRabbitELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175781
Anti-Mouse IgG H&LDonkey-PolyMouseELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175782
Anti-Mouse IgG H&LGoat-PolyMouseELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175783
Anti-Goat IgG H&LDonkey-PolyGoatWB, Flow Cyt, IHC-P, ELISA, ICC/IFab175784
Anti-Rat IgG H&LDonkey-PolyRatELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175785
Anti-Rat IgG H&LGoat-PolyRatELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-P, WBab175786
Anti-Chicken IgY H&LGoat-PolyChickenWB, IHC-P, ELISA, ICC/IF, Flow Cytab175787
Anti-Rabbit IgG H&L (preadsorbed)Donkey-PolyRabbitICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WB, IHC-Frab186693
Anti-Mouse IgG H&L (preadsorbed)Goat-PolyMouseICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WB, IHC-Frab186695
Anti-Rabbit IgG H&L (preadsorbed)Goat-PolyRabbitIHC-Fr, ICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WBab186697
Anti-Mouse IgG H&L (preadsorbed)Donkey-PolyMouseIHC-Fr, ICC/IF, ELISA, IHC-P, Flow Cyt, WBab186699
Anti-Mouse IgG H&L (preadsorbed)Rabbit-PolyMouseICC/IF, ELISA, WB, IHC-P, Flow Cytab186702

Webinar

下の画像の中央をクリックすると Webinar (ウェブを使ったセミナー) がスタートします。言語は日本語で時間は約 15 分です。

  • 概要: 蛍光法の操作の流れ / 蛍光法の利点
  • 応用: 蛍光法のコツ / 蛍光法多重染色のコツ / 検出機器 / よくある質問 FAQ
  • 製品: Alexa Fluor® 標識二次抗体 / 抗体標識キット / 蛍光ウェスタン・ブロット・キット

検出機器

上記 Webinar で述べられています。ご参照ください。

関連リンク


二次抗体ポータル

Alexa Fluor ポータル

Alexa Fluor 標識
二次抗体 FAQ

Fluorochrome chart
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Alexa Fluor® is a registered trademark of Life Technologies. Alexa Fluor® dye conjugates contain(s) technology licensed to Abcam by Life Technologies.

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