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ウエスタン・ブロッティング、免疫組織化学染色(IHC)、ELISA などで標識二次抗体を用いた間接法を行なう場合、特異性と再現性が高い実験結果を得るためには、信頼できる二次抗体を選ぶことが大切です。
アブカムの未標識、HRP 標識、Biotin 標識二次抗体にはそのデータシートに、ターゲット動物種以外のイムノグロブリンとの交差反応性など、次のようなデータを掲載している製品が数多くあります。
未標識 | HRP | Biotin | |
Goat anti-Rabbit IgG H&L | ab182016 | ab205718 | ab207995 |
Goat anti-Mouse IgG H&L | ab182017 | ab205719 | ab207996 |
Goat anti-Rat IgG H&L | ab182018 | ab205720 | ab207997 |
Goat anti-Chicken IgY H&L | ab182019 | ab205721 | ab207998 |
Donkey anti-Rabbit IgG H&L | ab182020 | ab205722 | ab207999 |
Donkey anti-Goat IgG H&L | ab182021 | ab205723 | ab208000 |
Donkey anti-Mouse IgG H&L | ab182022 | ab205724 | ab208001 |
Goat anti-Rabbit IgG H&-HRP(ab205718)を他社同等品(A.血清吸着処理なし、B.血清吸着処理済み)と、一次抗体反応なしのウエスタン・ブロッティングで比較。ab205718 は他社同等品よりもバックグラウンドが非常に低かった。
サンプル
Lanes 1, 5, and 9: Human spleen lysates (10 μg)
Lanes 2, 6, and 10: Human heart lysates (10 μg)
Lanes 3, 7, and 11: Mouse spleen lysates (10 μg)
Lanes 4, 8, and 12: Mouse heart lysates (10 μg)
方法
This blot was produced using a 4-12% Bis-tris gel under the MOPS buffer system. The gel was transferred onto a nitrocellulose membrane and then blocked for an hour using 2% Bovine Serum Albumin before being incubated with secondary antibodies at 0.05 μg/ml. Any non-specific background binding was detected following membrane incubation in ECL (ab133406) and 20 minute exposure.
Goat anti-Rat IgG H&L-HRP(ab205720)と他社同等品を、一次抗体に Anti-Tubulin ラット・モノクローナル抗体(ab6161)を用いたウエスタン・ブロッティングで比較。ab205720 は、他社同等品よりもバックグラウンドが低く、特異性が高かった。
サンプル
Lanes 1: Liver (Human) tissue lysate (10 μg)
Lanes 2: Liver (Mouse) tissue lysate (10 μg)
Lanes 3: Liver (Rat) tissue lysate (10 μg)
Lanes 4: HeLa whole cell lysate (10 μg)
Lanes 5: NIH 3T3 whole cell lysate (10 μg)
Lanes 6: PC12 whole cell lysate (10 μg)
方法
This blot was produced using a 4-12% Bis-tris gel under the MOPS buffer system. The gel was transferred onto a nitrocellulose membrane and then blocked for an hour using 2% BSA before being incubated with ab6161 overnight at 4C. Antibody binding was detected using ab205720 secondary antibody or a equivalent product from a competitor at 1/5,000 following membrane incubation in ECL (ab133406) and 15 seconds exposure.