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Cytochrome C ~ 注目ターゲットのおすすめ製品


ウサギ・モノクローナル 抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

Cytochrome CHu, Ms, RatICC/IF, IHC-P, IP, WB2 ab133504
Cytochrome CHu, Ms, RatICC, IHC-P, IP, WB3 ab76237
Cytochrome C Alexa Fluor® 488 HuFlow Cyt, ICC/IF ab192485
Cytochrome C Alexa Fluor® 647 Ms, Rat, HuICC/IF ab192486

抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

Cytochrome CMs-MHu, Ms, Rat,Dm, Hrs, PgnFlow Cyt, ICC/IF, IHC-Fr, IHC-P, WB2324 ab13575
Cytochrome CMs-MHu, Ms, Rat, Ce, CowFlow Cyt, ICC/IF, In-Cell ELISA, WB303 ab110325
Cytochrome CRb-PHu, Ms, RatELISA, ICC/IF, WB42 ab53056
Cytochrome C
Alexa Fluor® 488
Ms-MHu, Ms, Rat, Ce, CowFlow Cyt, ICC/IF ab154476
Cytochrome C
Alexa Fluor® 647
Ms-M Ms, Rat, Cow, Hu, CeICC/IF ab198583
抗体一覧

タンパク質・ペプチド

製品名

由来

適用・アプリケーション

製品番号

Cytochrome C proteinHuELISA, SDS-PAGE, WBab131847
Cytochrome C proteinHuHPLC, SDS-PAGEab172817
タンパク質・ペプチド一覧

キット

製品名

交差種

容量

製品番号

Cytochrome C ELISA Kit Ms1×96testsab210575
Cytochrome c Profiling ELISA KitHu, Ms, Rat, Cow96testab110172
Cytochrome c Matched Antibody Pair Kit Ms10×96testsab213745
Cytochrome c Releasing Apoptosis Assay KitHu, Ms, Rat100testab65311
キット一覧

Cytochrome C について

Function
機能
Electron carrier protein. The oxidized form of the cytochrome c heme group can accept an electron from the heme group of the cytochrome c1 subunit of cytochrome reductase. Cytochrome c then transfers this electron to the cytochrome oxidase complex, the final protein carrier in the mitochondrial electron-transport chain. Plays a role in apoptosis. Suppression of the anti-apoptotic members or activation of the pro-apoptotic members of the Bcl-2 family leads to altered mitochondrial membrane permeability resulting in release of cytochrome c into the cytosol. Binding of cytochrome c to Apaf-1 triggers the activation of caspase-9, which then accelerates apoptosis by activating other caspases.
Sequence similarities
配列類似性
  • Belongs to the cytochrome c family.
Post-translational modifications
翻訳後修飾
Binds 1 heme group per subunit.
Cellular localization
細胞内局在性
Mitochondrion matrix.

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Cancer
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Bcl ~
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PARP ~注目ターゲットのおすすめ製品


ウサギ・モノクローナル 抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

PARP Ms, Rat, HuFlow Cyt, ICC, ICC/IF, IHC-P, WB43 ab32138
PARPAlexa Fluor® 488 ab209430
PARPAlexa Fluor® 647 ab209431
Cleaved PARP Ms, Hu, RatIHC-P, WB1810 ab32064
Cleaved PARP HuFlow Cyt, ICC, IP, WB101 ab32561

抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

PARPRb-PHu, Ms, RatIHC-P, WB ab218132
PARPRb-PHu, Ms, Rat IHC-P, WB, ICC/IF, Flow Cyt ab194586
PARPMs-MHuELISA, IHC-Fr, IHC-P, IP, WB1 ab110915
Cleaved PARPRb-PHu, CowICC, WB104 ab4830
Cleaved PARPRb-PHuICC/IF, WB8 ab2317
Cleaved PARPMs-M Hu, MsWB2 ab13907
Cleaved PARPMs-MFlow Cyt, ICC ab170171
抗体一覧

タンパク質・ペプチド

製品名

由来

適用・アプリケーション

製品番号

PARP protein (Active)HuFuncS, SDS-PAGEab79663
PARP (mutated E988 K) protein (Active)HuSDS-PAGEab157027
PARP2 protein (Active)HuFuncS, SDS-PAGEab198766
タンパク質・ペプチド一覧

キット

製品名

交差種

容量

製品番号

Human Cleaved PARP ELISA Kit SimpleStep196testsab174441
Cleaved PARP Human In-Cell ELISA KIT (Colorimetric)196testsab139410
キット一覧

抗体カクテル

製品名

交差種

容量

製品番号

Apoptosis Western Blot Cocktail (pro/p17-caspase 3, cleaved-PARP, muscle actin)Hu200ulab136812
Cell Cycle and Apoptosis WB Cocktail (pCdk/pHH3/Actin/PARP)Hu200ulab139417
Apoptosis and DNA Damage Western Blot Cocktail (H2A.X(S139) +cleaved-PARP + Anti-GAPDH) Hu100ugab131385

生理活性物質

製品名

解説

製品番号

DR2313 (PARP Inhibitor XI)Potent, brain-penetrant and water-soluble PARP inhibitorab120368
3-Aminobenzamide (3-AB)PARP inhibitorab141069
PJ34 hydrochloridePotent, selective PARP-1 inhibitorab120981
DPQPotent, selective PARP-1 inhibitorab141461
UPF 1069Selective PARP2 inhibitorab144831
ErucinIsothiocyanate. Apoptosis inducer.ab141931
生理活性物質一覧

PARP について

Function
機能
Involved in the base excision repair (BER) pathway, by catalyzing the poly(ADP-ribosyl)ation of a limited number of acceptor proteins involved in chromatin architecture and in DNA metabolism. This modification follows DNA damages and appears as an obligatory step in a detection/signaling pathway leading to the reparation of DNA strand breaks. Mediates the poly(ADP-ribosyl)ation of APLF and CHFR. Positively regulates the transcription of MTUS1 and negatively regulates the transcription of MTUS2/TIP150.
Sequence similarities
配列類似性
  • Contains 1 BRCT domain.
  • Contains 1 PARP alpha-helical domain.
  • Contains 1 PARP catalytic domain.
  • Contains 2 PARP-type zinc fingers.
Post-translational modifications
翻訳後修飾
Phosphorylated by PRKDC. Phosphorylated upon DNA damage, probably by ATM or ATR. Poly-ADP-ribosylated by PARP2. Poly-ADP-ribosylation mediates the recruitment of CHD1L to DNA damage sites. S-nitrosylated, leading to inhibit transcription regulation activity.
Cellular localization
細胞内局在性
Nucleus.

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Caspase ~
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細胞死とアポトーシス

DNA 修復パスウェイ・
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標識二次抗体 | 血清吸着処理済み標識二次抗体 | 標識物の特長


標識二次抗体

ウサギ

マウス

ラット

ヤギ

トリ

ヒト

HRP

ab205718ab205719ab205720ab205723ab205721ab6858

Biotin

ab207995ab207996ab207997ab208000ab207998ab6857

AP

ab97048ab97020ab6846ab97107ab6878ab97162

Alexa Fluor® 405

ab175652ab175660ab175671ab175664ab175674

Alexa Fluor® 488

ab150077ab150113ab150157ab150129ab150169

Alexa Fluor® 555

ab150078ab150114ab150158ab150130ab150170

Alexa Fluor® 568

ab175471ab175473ab175476ab175474ab175477

Alexa Fluor® 594

ab150080ab150116ab150160ab150132ab150172

Alexa Fluor® 647

ab150079ab150115ab150159ab150131ab150171

Alexa Fluor® 680

ab175773ab175775ab175778ab175776ab175779

Alexa Fluor® 750

ab175732ab175740ab175751ab175744ab175754

Alexa Fluor® 790

ab175781ab175783ab175786ab175784ab175787


血清吸着処理済み標識二次抗体

ウサギ

マウス

ラット

ヤギ

トリ

ヒト

HRP

ab7090ab97040ab7097ab7125ab7118ab97175

Biotin

ab7089ab7067ab7096ab7124ab7117ab7152

AP

ab7091ab7069ab7098ab7126ab7119ab7154

Alexa Fluor® 405

ab175653ab175661ab175673ab175665ab175674

Alexa Fluor® 488

ab150081ab150117ab150165ab150133ab150173

Alexa Fluor® 555

ab150082ab150118ab150166ab150134ab150174

Alexa Fluor® 568

ab175695ab175701ab175710ab175704ab175711

Alexa Fluor® 594

ab150084ab150120ab150168ab150136ab150176

Alexa Fluor® 647

ab150083ab150119ab150167ab150135ab150175

Alexa Fluor® 680

ab186696ab186694

Alexa Fluor® 750

ab175733ab175741ab175753ab175745ab175755

Alexa Fluor® 790

ab186697ab186695

Alexa Fluor® is a registered trademark of Life Technologies. Alexa Fluor® dye conjugates contain(s) technology licensed to Abcam by Life Technologies.


標識物の特長

標識物

特長

Alexa Fluor®
  • 異なる蛍光波長を持つ9種類の色素からなるシリーズです。
  • FITC、Cy3®、Cy5®、APCなどの色素よりも高い蛍光強度を持ちます。そのため低い濃度で使用することができ、結果としてバックグラウンドが低くなります。
  • FITCなどで問題となる、光照射後の退色が小さいため、イメージングにおいて長時間の観察およびキャプチャーが可能となります。
  • 9種類もの色素があるので、お手元の装置のレーザーやフィルターのあらゆる組み合わせに対応できます。また多重染色における組み合わせに高い自由度があります。
HRP
  • 安価、安定性が高い、反応が早いといった特長のある酵素です。
  • 抗体に標識される酵素の中では最も多用されており、ウエスタン・ブロッティング、ELISA、免疫組織染色など、多くのアプリケーションで用いられています。
  • 赤血球などに存在する内在性酵素の影響を受けやすいため、免疫組織染色の際、ブロッキング処理が必要な場合があります。
  • ELISAで使用する水溶性の発色基質としてはTMBやABTS、免疫組織染色などで使用する不溶性の発色基質としてはDABやAECなどがあります。
AP
  • サンプル中の内在性酵素の影響を受けにくく、特異性が高い酵素です。
  • ELISAや免疫組織染色などで用いられています。
  • ELISAで使用する水溶性の発色基質としてはpNPP、免疫組織染色などで使用する不溶性の発色基質としてはBCIP/NBTなどがあります。
Biotin
  • 分子量 244.3 の低分子化合物で、卵白由来のタンパク質アビジン、あるいはバクテリア由来のタンパク質ストレプトアビジンと特異的に結合し、多数の酵素を含む複合体を形成させることができます。
  • 形成された複合体はシグナルが増幅されますので、発現の少ないタンパク質を免疫組織染色で検出する場合など、高感度を必要とする場合に有用です。
  • Biotin標識抗体は、このような増幅系を用いる場合の二次抗体として用います。

標識二次抗体フライヤー

ほしい製品がすぐに見つけられる製品早見表を掲載したフライヤーもご用意しています。

  • ダウンロードはこちら
  • 印刷物をご希望の方はメールにてご連絡ください。

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二次抗体ポータル

Alexa Fluor®ポータル

Bcl ~ 注目ターゲットのおすすめ製品


ウサギ・モノクローナル 抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

Bcl2 Ms, HuFlow Cyt, ICC/IF, IHC-P, IP, WB1510 ab32124
BCl6 HuICC, ICC/IF, IHC-P, IP, WB22 ab33901
Bcl G Hu, Ms, RatFlow Cyt, ICC/IF, IHC-P, IP, WB ab184925
BCL-XLHu, Ms, RatFlow Cyt, ICC/IF, IHC-P, IP, WB171 ab32370
BCL-XL (pS62) HuIHC-P, WB ab180849

抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

Bcl2Ms-M Ms, HuFlow Cyt, ICC/IF, IHC-Fr, IHC-P, IP, WB218 ab692
Bcl2 (pS70)Rb-PHuELISA, Flow Cyt, IHC-P, IP1 ab28819
Bcl2 (pS87)Rb-PHu, RatELISA, IHC-P, WB1 ab73985
Bcl6Rb-PHu, Ms, RatFlow Cyt, IHC-Fr, IP, WB4 ab19011
Bcl10Ms-M HuFlow Cyt, ICC/IF, IHC-Fr, IHC-P, IP, WB ab199011
BCL-XLRb-PHu, Ms, RatICC, ICC/IF, IP, WB67 ab2568
抗体一覧

タンパク質・ペプチド

製品名

由来

適用・アプリケーション

製品番号

Bcl-XL protein (Active )HuFuncS, SDS-PAGEab180062
Bcl 7A proteinHuMS, SDS-PAGEab139229
Bcl rambo proteinHuELISA, SDS-PAGE, WBab132125
Bcl2 proteinHuFuncS, WBab73696
Bcl2L2 proteinHuFuncS, SDS-PAGEab58944
タンパク質・ペプチド一覧

キット

製品名

交差種

容量

製品番号

Bcl-2 ELISA Kit SimpleStep Hu196testsab202411
キット一覧

抗体アレイ

製品名

ターゲット

交差種

容量

製品番号

Apoptosis Antibody Array (43 Targets)Bad, Bax, Bcl-2, Bcl-w, BID, BIM, Caspase3, Caspase8, CD40, CD40L, cIAP-2, cytoC, DR6, Fas, FasL, HSP27, HSP60, HSP70, HTRA, IGF-I, IGF-II, IGFBP-1, IGFBP-2, IGFBP-3, IGFBP-4, IGFBP-5, IGFBP-6, IGF-1sR, livin, p21, p27, p53, SMAC, Survivin, sTNF-R1, sTNF-R2, TNF-alpha, TNF-beta, TRAILR-1, TRAILR-2, TRAILR-3, TRAILR-4, XIAPHu1×2memb
1×4memb
1×8memb
ab134001

生理活性物質

製品名

解説

製品番号

HA14-1Cell permeable Bcl-2 inhibitor. BH-3 mimetic.ab141306
ABT-737BH3 mimetic Bcl-xL, Bcl-2 and Bcl-w inhibitorab141336
2-Methoxyantimycin A3Bcl-xL and Bcl-2 inhibitor. Apoptotic.ab141523
Z36Novel inhibitor of Bcl-XLab141757
ABT-199Potent, selective Bcl-2 inhibitor.ab217298
AT 101Pro-apoptotic agent. BH3-mimetic. Bcl-2 and Mcl-1 inhibitor.ab145624
生理活性物質一覧

ライゼート

製品名

適用・アプリケーション

製品番号

Bcl G 293T Transfected Lysate (positive control)WBab94328

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注目ターゲット

Cancer
ポータル

アポトーシス・
アッセイ・キット

アポトーシスにおけるカルシウム・シグナル

Tau ~ 注目ターゲットのおすすめ製品


Tau 抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

TauMs-MHu, Ms, Rat, Cow, ShpFlow Cyt, ICC/IF, IP, WB73 ab80579
TauHu, Ms, RatIHC-P, IP, WB133 ab32057
TauChk-PHu, Ms, RatICC, IHC-P, WB12 ab75714
TauHu, Ms, RatFlow Cyt, ICC/IF, WB11 ab76128
TauHuFlow Cyt, IHC-P3
ab93726
抗体一覧


リン酸化 Tau 抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

Tau (pS199)Hu, Ms, RatWB11 ab81268
Tau(pS235)Rb-PHu, Ms, RatELISA, WB2 ab30664
Tau(pS262)Rb-P Ms, Cow, Hu, Zfsh, A leptDot, ICC, ICC/IF, IHC-FoFr, WB67 ab64193
Tau(pS396) Ms, Rat, HuICC/IF, IHC-P, WB5ab109390
Tau(pS404)Hu, Ms, RatIHC-P, WB3 ab92676
Tau(pT231)Hu, Ms, RatIHC-P, IP, WB2 ab151559
抗体一覧


蛍光標識 Tau 抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

Tau  Phycoerythrin MsFlow Cyt ab210985
Tau  Alexa Fluor® 488 MsICC/IF ab206060
Tau Alexa Fluor® 555 Ms ICC/IF ab215290
Tau Alexa Fluor® 647 MsICC/IF ab206061
抗体一覧

タンパク質・ペプチド

製品名

由来

適用・アプリケーション

製品番号

Tau proteinHuHPLC, SDS-PAGEab199583
Tau (mutated N352 H) proteinHuSDS-PAGEab190399
タンパク質・ペプチド一覧

生理活性物質

製品名

解説

製品番号

YM-08Blood-brain barrier permeable Hsp70 inhibitor. Selectively reduces phosphorylated tau levels. MKT-077 derivative.ab146424
YM-01 (YM-1)Allosteric Hsp70 modulator. Potent anti-tau agent. MKT-077 analog. Promotes triage functions of Hsp70. Rapidly and potently reduces tau levels ex vivo. Shows antitumor effects in vivo. ab146423

Tau について

Function
機能
Promotes microtubule assembly and stability, and might be involved in the establishment and maintenance of neuronal polarity. The C-terminus binds axonal microtubules while the N-terminus binds neural plasma membrane components, suggesting that tau functions as a linker protein between both. Axonal polarity is predetermined by tau localization (in the neuronal cell) in the domain of the cell body defined by the centrosome. The short isoforms allow plasticity of the cytoskeleton whereas the longer isoforms may preferentially play a role in its stabilization.
Tissue specificity
組織特異性
Expressed in neurons. Isoform PNS-tau is expressed in the peripheral nervous system while the others are expressed in the central nervous system.
Developmental stage
発生段階
Four-repeat (type II) tau is expressed in an adult-specific manner and is not found in fetal brain, whereas three-repeat (type I) tau is found in both adult and fetal brain.
Cellular localization
細胞内局在性
Cytoplasm > cytosol. Cell membrane. Cytoplasm > cytoskeleton. Cell projection > axon. Mostly found in the axons of neurons, in the cytosol and in association with plasma membrane components.

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タウ・タンパク質と
アルツハイマー病

タウ・タンパク質と
アルツハイマー病 Webinar

HNF ~ 注目ターゲットのおすすめ製品


ウサギ・モノクローナル 抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

HNF1 beta HuIHC-P ab213149
HNF1 alpha+HNF1 beta HuIHC-P ab209666
HNF4 alpha Hu, Ms, RatChIP, IHC-P, IP, WB ab181604
HNF4 alpha Hu, Ms, RatFlow Cyt, WB, IHC-P, ICC/IF ab201460
HNF6 Hu, Ms, RatWB ab186743

抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

HNF1 alphaRb-P HuICC/IF, IHC-P, WB ab204306
HNF1 betaGoat-PHuELISA, ICC/IF, WB1 ab59118
HNF4 alpha (pS304)Rb-P Ms, Rat, HuWB ab194930
HNF4 alpha (pS313)Rb-PHuELISA, ICC/IF, IHC-P, WB ab78356
HNF6Rb-P HuELISA, IHC-P, WB1 ab83564
抗体一覧

タンパク質・ペプチド

製品名

由来

適用・アプリケーション

製品番号

HNF1 beta proteinHuELISA, SDS-PAGE, WBab116782
HNF4 alpha protein HuELISA, SDS-PAGE, WBab114232
HNF4 gamma protein HuELISA, SDS-PAGE, WBab116986
HNF6 full length proteinHuDot, ELISA, SDS-PAGE, WBab98300
タンパク質・ペプチド一覧

キット

製品名

交差種

容量

製品番号

HNF-4-alpha ELISA Kit Hu1×96testsab210581
HNF (HNF1, HNF3alpha, HNF3beta, HNF4alpha) Transcription Factor Assay KitHu,Ms,Rat2×96testsab207208
HNF1 Transcription Factor Assay KitHu,Ms,Rat1×96tests
5×96tests
ab207209

HNF について

HNF1 alpha
Function
機能
Transcriptional activator that regulates the tissue specific expression of multiple genes, especially in pancreatic islet cells and in liver. Required for the expression of several liver specific genes. Binds to the inverted palindrome 5'-GTTAATNATTAAC-3'.
Tissue specificity
組織特異性
Liver
Involvement in disease
疾患関連性
  • Defects in HNF1A are a cause of hepatic adenomas familial (HEPAF) .
  • Defects in HNF1A are the cause of maturity-onset diabetes of the young type 3 (MODY3) .
  • Defects in HNF1A are the cause of susceptibility to diabetes mellitus insulin-dependent type 20 (IDDM20) .
Sequence similarities
配列類似性
  • Belongs to the HNF1 homeobox family.
  • Contains 1 homeobox DNA-binding domain.
Cellular localization
細胞内局在性
Nucleus.
HNF1 beta
Function
機能
Transcription factor, probably binds to the inverted palindrome 5'-GTTAATNATTAAC-3'.
Involvement in disease
疾患関連性
  • Defects in HNF1B are the cause of renal cysts and diabetes syndrome (RCAD).
  • Defects in HNF1B may be rare genetic risk factor contributing to the development of non-insulin-dependent diabetes mellitus (NIDDM).
  • Defects in HNF1B may be a cause of susceptibility to prostate cancer hereditary type 11 (HPC11).
Sequence similarities
配列類似性
  • Belongs to the HNF1 homeobox family.
  • Contains 1 homeobox DNA-binding domain.
Cellular localization
細胞内局在性
Nucleus.
HNF4 alpha
Function
機能
Transcriptionally controlled transcription factor. Binds to DNA sites required for the transcription of alpha 1-antitrypsin, apolipoprotein CIII, transthyretin genes and HNF1-alpha. May be essential for development of the liver, kidney and intestine.
Involvement in disease
疾患関連性
Defects in HNF4A are the cause of maturity-onset diabetes of the young type 1 (MODY1) .
Sequence similarities
配列類似性
  • Belongs to the nuclear hormone receptor family. NR2 subfamily.
  • Contains 1 nuclear receptor DNA-binding domain.
Post-translational modifications
翻訳後修飾
Phosphorylated on tyrosine residue(s); phosphorylation is important for its DNA-binding activity. Phosphorylation may directly or indirectly play a regulatory role in the subnuclear distribution.
Cellular localization
細胞内局在性
Nucleus.
HNF6
Function
機能
Transcriptional activator. Binds the consensus sequence 5'-DHWATTGAYTWWD-3' on a variety of gene promoters such as those of HNF3B and TTR. Important for liver genes transcription.
Tissue specificity
組織特異性
Highly expressed in liver; lower expression in testis and skin.
Sequence similarities
配列類似性
  • Belongs to the CUT homeobox family.
  • Contains 1 CUT DNA-binding domain.
  • Contains 1 homeobox DNA-binding domain.
Cellular localization
細胞内局在性
Nucleus.

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注目ターゲット



ワンステップ ELISA の秘密

The ideal assay for biomarkers and drug targets

癌などの疾患に関するバイオマーカーや創薬ターゲットの探索においては、その候補である分子や、その分子によって影響を受ける別の分子を検出・定量するアッセイ系が必要となります。アッセイ系としてはウエスタン・ブロッティング、免疫組織染色、ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay; エライザ)、質量分析、などが挙げられますが、サンプルが血清や血漿のように容易に採取できるものであること、特異性と感度が共に高いこと、操作が簡単なこと、といった条件を満たせるのは ELISA だけであると言えます。

ELISA の中で最も高感度であり、また特異性が高いのはサンドイッチ ELISA と呼ばれる系です。事実、キットとして販売されている製品の多くにはこの系が採用されています。96 ウェル・マイクロプレート・フォーマットのキットにおいては、ウェルに予め抗体が固定化されており、その固定化抗体(捕捉抗体)が添加されたサンプル中のターゲット・タンパク質を捕捉します。次いで検出用の抗体を添加し、固定化抗体(捕捉抗体)-ターゲット・タンパク質-検出用抗体のサンドイッチを形成させます。検出用抗体には酵素が標識されており、これらを使って発色反応を行います(図 1)。

サンドイッチ ELISA は優れた系ではありますが、その操作ステップは、サンプルの添加 → インキュベーション 1 → 洗浄 → 検出用抗体の添加 → インキュベーション 2 → 洗浄 → 発色、と数が多くまた時間もかかります。検出用抗体としてビオチン標識抗体を用いた、インキュベーション 3 が必要なキットもありますが、当然さらに時間がかかります(図 2 右列)。ウェルにサンプルと検出用抗体を同時に添加し、インキュベーションを 1 回だけにすれば、時間を短くすることができ、また当然操作も簡単になります。さらに免疫反応の効率が高いことから、感度も高くなります。アブカムの SimpleStep ELISA® は、このような「ワンステップ・サンドイッチ ELISA」のキットで、従来の ELISA キットよりも時間が大幅に短縮されます(図 2 左列)。さらに、ELISA においてばらつきの原因となる洗浄操作が 1 回だけですむこのキットには、ばらつきの低下も期待できます。


図 1:サンドイッチ ELISA の反応模式図

図 2:反応・操作時間の比較
(クリックで拡大)

One-Step Immunoaffinity Capture Technology

このようにワンステップのサンドイッチ ELISA はメリットの大きい方法ですが、単純にターゲット・タンパク質に対する固定化抗体(補足用抗体)を用いてサンドイッチを組んだ場合には、サンプル中のターゲット・タンパク質の量が極めて大きくなるとシグナルが低下してしまう、いわゆるフック現象*1が起こってしまい、定量アッセイとして問題があります。

アブカムの SimpleStep ELISA® においては固定化抗体として、ターゲット・タンパク質に対する抗体ではなく、エピトープ・タグに対する抗体を用いています。サンドイッチはそのエピトープ・タグを標識した補足用抗体と、酵素を標識した検出用抗体で組んでいます。そのサンドイッチを、固定化抗体が捕捉します(図 3)。この系ではフック現象は起こり得ません。


図 3:SimpleStep ELISA® の反応模式図
(クリックで拡大)

なおサンドイッチ ELISA キットの中には、アビジンービオチン系の強い親和性を利用した製品もありますが、アブカムの SimpleStep ELISA® では使用していません。ビオチンは、サンプルとして使用される可能性のある血漿、細胞培養液、ミルクなどにも存在し、アッセイ系に影響を与える可能性があるからです。

Specificity for target proteins in complex biological samples

サンドイッチ ELISA 系を作成する際に重要なことは、感度と特異性が共に高くなるような、捕捉用抗体の結合と検出用抗体の組み合わせを選択することです。市販のキット製品においては、ロット間較差を小さくするため通常、モノクローナル抗体が使用されます。アブカムはマウス・モノクローナル抗体よりも特異性が高く、親和性については 100 倍ほども高い、ウサギ・モノクローナル抗体 RabMAb® を多数ラインアップしており、SimpleStep ELISA® キット用の組み合わせについては多くの場合、これら抗体の中からスクリーニングされ、選択されます。図 4 にケモカインの一種、マウス CXCL2(MIP2)における例を示します。

図 4:マウス・ケモカインの一種、CXCL2 に対するサンドイッチ ELISA を、3 種類の RabMab® 1、2、3 を組み合わせて作成し、感度を比較した。いずれの組み合わせも他社製品(Competitor)よりも高い感度を示したが、特に 1/2 の組み合わせが最も高かった。

図 3 のような抗体の組み合わせ検討の際には、抗原としては多くの場合ターゲット・タンパク質のリコンビナントが用いられます。組み合わせが決まったら、この組み合わせの系がリコンビナント・タンパク質だけでなく、生体サンプル由来のネイティブなターゲット・タンパク質にも確実に反応するかどうかを確認します。また、血清、血漿、細胞培養上清などのサンプルとなり得る溶液中に含まれる物質に、アッセイが影響を受けないかどうかを添加回収試験(Spike assay)にて確認します。

ターゲット・タンパク質のファミリーなど、類似する配列を有するタンパク質に対する交差性も調べます。例えば、Mouse MIP2/CXCL2 SimpleStep ELISA® kit(ab204517)の場合、CXCL2 と 82 % の相同性を有する CXCL3 および 63 % の相同性を有する CXCL1 について調べています。2 μg/mL という高濃度でも、CXCL3 および CXCL1 のシグナルは、バックグラウンドと同程度でした。また動物種ごとの反応性も調べます。Mouse MIP2/CXCL2 SimpleStep ELISA® kitの場合、ラット、ヤギ、ブタ由来の CXCL2 の反応性は、マウスの 3 % 以下でした。

Improved sensitivity without interference

このようにして作成されたワンステップ ELISA、SimpleStep ELISA® kit は、2 ステップや 3 ステップのキット製品と比較し、操作が簡単で時間が短い上に、感度も高くなります。例えば Human CXCL16 SimpleStep ELISA® kit(ab187397)と Human ENO1 SimpleStep ELISA® kit(ab181417)の感度は共に、広く使用されている他社の 3 ステップ ELISA キット製品よりも非常に高くなっています(図 5)。

図 5:SimpleStep ELISA キットと、3 ステップが必要な他社キット(Standard 3-step ELISA)の標準曲線の比較

Antibodies to mouse targets for enhanced assay performance

ある抗原に対する結合の特異性と親和性は一般的に、同じ動物種由来の抗体よりも異なる動物種由来の抗体の方が高いため、マウス由来タンパク質に対する ELISA キットは、マウス以外の動物種由来の抗体を用いる方が望ましいと考えられます。しかしながら市販されているマウス由来タンパク質に対する ELISA キットは、マウス由来抗体を使用した製品が多いのが現状です*2

アブカムのマウス由来サンプル用の SimpleStep ELISA キットは、ウサギ・モノクローナル抗体 RabMAb® を使用しています。そのため、一般的なマウス由来サンプル用の ELISA キットに比べて、高い特異性と感度を実現しています(図 6)。

図 6:マウス用 SimpleStep ELISA キットと、他社マウス用 ELISA キットの標準曲線の比較
左 Mouse IL-5 SimpleStep ELISA kit (ab204523)と他社同等品
右 Mouse IL-1 beta SimpleStep ELISA kit (ab197742)と他社同等品

*1フック現象(プロゾーン現象):ワンステップの ELISA において、抗原(ターゲット・タンパク質)が固定化抗体(捕捉抗体)および検出用抗体の結合できる量よりも多く存在すると、固定化抗体と結合するが検出用抗体とは結合しない抗原や、検出用抗体と結合するが固定化抗体とは結合しない抗原が存在するようになり、固定化抗体-抗原-検出用抗体のサンドイッチ形成を妨げます。その結果、抗原が多ければ多いほど反応(シグナル)が下がってしまいます。

*2 ポリクローナル抗体はロット間にばらつきが生じやすく、キットの性能を一定にすることが難しいため、ELISA キットの抗体には通常、モノクローナル抗体が用いられます。モノクローナル抗体はマウス由来のものが多いため、結果としてキットに使用される抗体は、マウス由来が多くなります。


おすすめの SimpleStep ELISA® kit

SimpleStep ELISA® kit 製品一覧

ウエスタン・ブロッティングをトータルにサポート

サンプルの調製 電気泳動 トランスファー

抗体反応と検出 関連リンク 

サンプルの調製

ライゼート(細胞・組織)

ウエスタン・ブロッティングの操作が正しかったかどうかを確認するために、また抗体が確実に反応しているかどうかを評価するために、ポジティブ・コントロール・サンプルのレーンを加えることをお勧めします。そのポジティブ・コントロールとしては一般的に、ターゲット・タンパク質が発現していることが明かな細胞・組織のライゼートを用います。

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細胞分画キットとミトコンドリア分離キット

ターゲット・タンパク質がどのオルガネラに局在しているかが明らかである場合には、サンプルは全細胞ではなく、細胞画分を使用した方がきれいな結果が得られます。アブカムは機器による細胞破砕を行うことなく、組織や細胞からミトコンドリア、細胞質、核を分離するキットを多数ラインアップしています。

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サンプル調製用バッファー

製品名

製品番号

10 X RIPA Bufferab156034
Native lysis Buffer ab156035
Optiblot Bradford Reagentab119216

プロテアーゼおよびホスファターゼ・インヒビター・カクテル

タンパク質の発現やシグナル伝達の解析の実験を行うに当たって問題となる、サンプル中のタンパク質の分解や脱リン酸化を抑える各種酵素阻害剤をミックスした製品です。

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タンパク質定量キット

製品名

製品番号

BCA Protein Quantification Kitab102536
Protein Quantitation Kit (Bradford Assay)ab156035

サンプル・バッファー

製品名

製品番号

Optiblot SDS-PAGE Sample Preparation Kitわずか 10 分でグアニジン、尿素、硫酸アンモニウムなどを除去するキット。ab133414
Optiblot DTT Reducer (10X)タンパク質の -SS- 結合を切断し、還元する試薬。β-メルカプトエタノールよりも作用は穏やか。ab119199
Optiblot LDS Sample Buffer (4X)Optiblot 電気泳動ゲル用に最適化されたバッファー。ab119196

電気泳動

電気泳動ゲル

従来のゲルと比較し、次のような特長があります。

  • 長い使用期限: 同じロットを長期間使い続けることができる
  • 耐久性: 自作のゲルや従来の市販のゲルよりも高い強度持ったゲル
  • サンプルのアプライが容易: ウェルの部分が着色してあり、見やすい
  • すぐに実験可能: コームをはずす必要がないので、ウェル間を崩すことがない
  • 改良版泳動バッファー: 従来のトリス-グリシン・バッファー(Laemmli バッファー)をさらに最適化
  • 堅固なウェル: ウェルの形が崩れにくく、ウェル間のコンタミネーションの恐れがない
  • 10x10 cm と 8x10 cm のゲルをラインアップ: 広く用いられている各社泳動装置で使用可能
  • 1パッケージ 10 枚入り

詳細と製品一覧はこちら(英語) ≫

分子量マーカー

予めマーカー・タンパク質を染色してあるため、ゲルやメンブレンのタンパク質染色が必要なく、また分子量の同定が容易です。

製品名

製品番号

Prism Protein Ladder (10-175 kDa)ab115832
Prism Ultra Protein Ladder (10 - 180 kDa)ab116027
Prism Ultra Protein Ladder (10-245 kDa)ab116028
Prism Ultra Protein Ladder (3.5 - 245 kDa)ab116029
Optiblot Prestained Markerab119210

電気泳動バッファー

製品名

製品番号

Optiblot SDS Run Buffer (20X)Tris-Tricine ベースの非還元サンプル用の泳動バッファーで、高分子量タンパク質の分離能が高いのが特長。ab119197
Optiblot Antioxidant (800X)還元タンパク質サンプルが泳動中に酸化されることを抑える。ab119200

トランスファー

メンブレン

製品名

サイズ(包装)

製品番号

Nitrocellulose Transfer Membrane- 0.45 um8 x 10 cm (10 sheets)ab133412
Nitrocellulose Transfer Membrane- 0.22 um8 x 10 cm (10 sheets)ab133413
Low Fluorescence Western Membrane (PVDF)9 x 7 cm (10 sheets)ab133411

タンパク質染色

製品名

製品番号

Ponceau Sメンブレンに転写されたタンパク質をピンクに染色。ab146313
Optiblot Blueメンブレンに転写されたタンパク質を青色に染色。Coomassie ベースの染色剤で、Ponceau S よりも感度が高い。ab119211

抗体反応と検出

ブロッキング・バッファー

製品名

製品番号

10 X Blocking Bufferab126587
Sea Block Bufferab166951

ローディング・コントロール

ウエスタン・ブロッティングにおいてポジティブ・コントロールとして使用する抗体で、次のことを目的としています。

  • 電気泳動において各レーンのサンプルが均等に泳動されていることを確認する。
  • ゲルからメンブレンにバンド(タンパク質)が確実に転写されていることを確認する。
  • 異なるサンプル中に存在する特定のターゲット・タンパク質の量を補正・比較する。

詳細と製品一覧はこちら ≫

ブロッキング・ペプチド

ペプチド・ブロッキング試験で使用するペプチドです。ウエスタン・ブロッティングや免疫組織染色などの抗体を用いた実験において、抗体がターゲット抗原とは異なる物質に非特異的に結合し、擬陽性のシグナルが検出されることがあります。ペプチド・ブロッキング試験は、抗体の反応がこのような非特異的なものではないということを証明する方法の一つです。

詳細はこちら ≫

アブカムのウサギ・モノクローナル抗体 RabMAb® につきましては、ブロッキング・ペプチドをカスタム・オーダーでご購入することができます(一部製品を除く)。

ご購入方法はこちら ≫

AbExcel

AbExcel (アブエクセル)とは、ウエスタン・ブロッティングに特に強くお勧めできる標識二次抗体のサブブランド名です。製品は、標識酵素 AP および HRP の 2 種、一次抗体の由来動物はウサギ、マウス、ヤギなど 5 種(計 18 製品)です。

詳細と製品一覧はこちら ≫

洗浄剤

製品名

製品番号

Tween 20 (Polyoxyethelenesorbitan Monolaurate)ab128987
20x TBS-T(TBS with Tween 20)ab64204

ECL 検出キット

製品名

製品番号

Optiblot ECL Detect Kit (23pg-187ng)ab133406
Optiblot ECL Max Detect Kit (4.6pg-4.7ng)ab133408
Optiblot ECL Ultra Detect Kit (1.2pg-2ng)ab133409

メンブレン・ペン

製品名

製品番号

Optiblot Luminol Membrane Pen ab166858

ウエスタン・ブロッティング関連リンク


技術情報一覧

FAQ

Trouble
shooting

RabMAb 標準
プロトコール

10 のポイント

コントロール

蛍光 WB

HA-Tag ~ 注目ターゲットのおすすめ製品


抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

HA tag WB ab182009
HA tagRb-PChIP, ChIP/Chip, ELISA, Flow Cyt, ICC, ICC/IF, IP, WB17342 ab9110
HA tagMs-MChIP/Chip, ICC, ICC/IF, IP, WB2516 ab18181
HA tagMs-MChIP, ELISA, ICC, IP, WB1312 ab1424
HA tag FITCMs-MFlow Cyt, ICC/IF5 ab1789
HA tag HRPGoat-PELISA, ICC, WB4 ab1265
HA tag BiotinMs-MIP, WB1 ab27987
抗体一覧

タンパク質・ペプチド

製品名

由来

適用・アプリケーション

製品番号

HA tag peptideBLab13835
タンパク質・ペプチド一覧

HA-Tag について

Relevance
関連性
Human influenza hemagglutinin (HA) is a surface glycoprotein required for the infectivity of the human virus. The HA tag is derived from the HA molecule corresponding to amino acids 98-106 has been extensively used as a general epitope tag in expression vectors. Many recombinant proteins have been engineered to express the HA tag, which does not appear to interfere with the bioactivity or the biodistribution of the recombinant protein. This tag facilitates the detection, isolation, and purification of the proteins.
Alternative names
別名
  • HA epitope tag antibody
  • HA1 antibody
  • HA2 antibody
  • hemagglutinin antibody
  • Hemagglutinin HA1 chain antibody
  • Hemagglutinin HA2 chain antibody

関連リンク


注目ターゲット

エピトープ・タグ抗体と
レポーター・タンパク質抗体

エピトープ・タグ抗体

Cdk1 ~ 注目ターゲットのおすすめ製品


抗体

ターゲット名

交差種

適用・アプリケーション

文献

Abreview
数 評価

製品番号

Cdk1Ms-MHu, Ms, Rat, Chk, XlELISA, Flow Cyt, ICC/IF, IHC-FoFr, IHC-Fr, IHC-P, IP, RIA, WB202 ab18
Cdk1Ms-MHu, Ms, Cow, Mink, MkFlow Cyt, ICC/IF, IHC-P, IP, WB32 ab8040
Cdk1 HuICC/IF, IHC-P, IP, WB21 ab133327
Cdk1Hu, Ms, RatWB ab32094
Cdk1 (pY15)Rb-PHu, Ms, RatELISA, WB82 ab47594
Cdk1 (pY1004)Ms-MS pomWB9 ab5467
抗体一覧

タンパク質・ペプチド

製品名

由来

適用・アプリケーション

製品番号

CDK1 Recombinant proteinHuELISA, WBab158068
CDK1 Recombinant proteinHuSDS-PAGEab187447
CDK1 peptideFuncS, HPLCab204883
タンパク質・ペプチド一覧

キット

製品名

交差種

容量

製品番号

CDK1 ELISA Kit Hu1x96testsab212162
キット一覧

Cd1k について

Function
機能
Plays a key role in the control of the eukaryotic cell cycle. It is required in higher cells for entry into S-phase and mitosis. p34 is a component of the kinase complex that phosphorylates the repetitive C-terminus of RNA polymerase II.
Tissue specificity
組織特異性
Isoform 2 is found in breast cancer tissues.
Sequence similarities
配列類似性
  • Belongs to the protein kinase superfamily.
  • CMGC Ser/Thr protein kinase family.
  • CDC2/CDKX subfamily.
  • Contains 1 protein kinase domain.
Cellular localization
細胞内局在性
Nucleus.

関連リンク


注目ターゲット

Cdk2

Cdk4

Cyclin

細胞周期の制御における Cdk と Cyclin

細胞周期 G1/S インタラクティブ・パスウェイ

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