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Western blot
All lanes : Anti-active Caspase 3 antibody (ab13847) at 1/500 dilution Lanes 1-6: Exposure time 5 min.
Lane 1 : Hela whole cell lysate at 20 µg
Lane 2 : A431 whole cell lysate at 20 µg
Lane 3 : Jurkat whole cell lysate at 20 µg
Lane 4 : Hela whole cell lysate at 20 µg with
Lane 5 : A431 whole cell lysate at 20 µg with
Lane 6 : Jurkat whole cell lysate at 20 µg with
Lane 7 : Recombinant Human caspase 3 (active) recombinant protein at 0.1 µg
Lane 8 : Recombinant Human caspase 3 (active) recombinant protein at 0.1 µg with
Secondary
Goat polyclonal Secondary Antibody to Rabbit IgG - H&L (HRP) (ab6721) at 1/5000 dilution
developed using the ECL technique
Predicted band size : 17 kDa
Lanes 7-8: Exposure time 30 sec.
ab13847 detects a 17kDa band when tested on recombinant active Caspase 3. This was produced by combining the 17kDa and 12kDa subunits produced separately as recombinant proteins. ab13847 also detects a 17kDa band on lysates from HeLa, A431 and Jurkat cells. These bands can be blocked by the immunising peptide. This strongly suggests that ab13847 is specific for active Caspase 3.
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