Histone Acetyltransferase Activity Assay Kit (Colorimetric) (ab65352)

Haben Sie das Nukleaere Extrakt auch einzeln erhaeltlich?

ANSWER:

Vielen Dank für Ihren Anruf.
Nach Rücksprache mit den entsprechenden Abteilungen tut es mir leid, Ihnen mitteilen zu müssen, dass wir derzeit weder das Nukleäre Extrakt (NE) einzeln erhältlich noch andere passende Zelllysate bzw. Kernextrakte in unserem Katalog verfügbar haben.
Die genauen Extraktionsbedingungen für das im Kit enthaltene NE konnte das Labor leider nicht weitergeben, weil es sich hierbei um ein Betriebsgeheimnis handelt. Allerdings sollte jedes Lysat mit HAT-Aktivität als Positivkontrolle für diesen Kit geeignet sein, also nicht nur Jurkat-Zellen. Obwohl auch Ganzzelllysate verwendet werden können, würden wir Kernextrakte empfehlen, da HAT im Kern lokalisiert sind. Aufgrund der unterschiedlichen Methoden zur Gewinnung der NE ist eine Optimierung jedoch empfehlenswert.
Wir versuchen nach Möglichkeit alle wichtigen Daten über unsere Produkte an unsere Kunden weiterzugeben und ich möchte mich dafür entschuldigen, dass dies in diesem Fall nicht möglich ist.
Bitte zögern Sie nicht, sich wieder bei uns zu melden, falls Sie weitere Fragen haben.

Sehr geehrte Damen und Herren, ich habe Interesse an dem von Ihnen angebotenen Histone Acetyltransferase Activity Assay Kit (Colorimetric) (ab65352). Jedoch habe ich ein paar Fragen, die ich von Ihnen gern beantworten haben moechte. In den Referenzen, die angegeben sind, wurde die Aktivität der HATs aus Saeugern nachgewiesen. Wie sieht es denn mit Drosophila melanogaster aus? Wissen Sie vielleicht, ob andere Drosophila Arbeitsgruppen das Kit schon mal bestellt und moeglicherweise einen Erfahrungsbericht bei Ihnen abgegeben haben. Denn ohne eine Referenz aus diesem Feld ist es mir zu riskant ein Kit fuer 100 Ansaetze zu bestellen, da ich sonst zu einem guenstigeren Kit von Firma XY mit nur 48 Ansaetzen (und einer fluorenszenten Auswertungsmoeglichkeit) tendieren wuerde. Bieten Sie auch ein kleineres Probe-Kit an? Vielen Dank schon mal im Voraus fuer Ihre Muehe Mit besten Gruessen

ANSWER:

Vielen Dank fuer Ihre Anfrage. Dieses Kit wurde nur mit Saeugetierproben getestet und dafuer optimiert. Uns liegen keine Daten oder Publikationen vor ueber die Verwendung diese Kits mit Drosophila Proben vor. Da wir derzeit ueber 75000 Produkte in unserem Katalog verfuegbar haben, koennen wir aus logistischen Gruenden leider keine kostenlosen Proben zu Testzwecken anbieten. Hier bei Abcam verfahren wir so, dass wir einen kostenlosen Ersatz oder eine Gutschrift verschicken, falls ein Produkt nicht so funktioniert wie auf unserem Datenblatt beschrieben. Es tut mir leid, dass ich Ihnen keine positive Antwort auf Ihre Fragen geben konnte und wuensche Ihnen viel Erfolg mit Ihrer Forschung.

Protocol for ab65352

ANSWER:

Thank you for calling Abcam.

Please find attached the updated datasheet for ab65352.

If there is anything else I can help you with, please let me kn

Can this Histone Acetyltransferase Activity Assay Kit (Colorimetric) also be used to measure Tubulin Acetyltransferase activity?

ANSWER:

Thank you for contacting us.  The lab has confirmed that this kit has not been validated for measuring Tubulin Acetyltransferase activity.  We have no information about whether it would be suitable for this purpose, but the kit was specifically designed for measuring Histone Acetyltransferase Activity.  I am sorry I could not be more helpful, please let me know if you have any other questions. 

Dear technical team,   Regarding this product, there are some questions.   1. how to calculate the OD and results?   2. the source of "1x50ul Nuclear Extract(4mg/ml)". Is this HeLa cell extract?   3. Is it possible to purchase Nuclear Extract component of this kit?     Best regards,

ANSWER:

Thank you very much for your inquiry.

1.)

I can confirm that the HAT activity can be expressed as the relative O.D. value per µg or nmol/min/µg sample.

Please have a look at the following example calculation:

A. Relative OD/ug: One obtains two readings at two time points in a linear region (from measuring OD kinetically) Example: suppose background (BG) and Sample (S) gave readings of 0.1 and 0.25 at T = 3 min and 0.12 and 0.6 at T = 30 min and sample was at 50 ug in 40 ul water. Then OD2 = 0.48 and OD1 = 0.15 (after subtracting background) so Rel Activity = (0.48-0.15)/(27*50) = 0.33 per min per ug. (27 is the time interval 30 min - 3 min)

B. For nmol/min/ug: Need to first determine pathlength-which depends on the 96-well plate used and any meniscus from the buffers so: 1. First take any solution in the 1X HAT assay buffer (just dilute 1:1 with water) and adjust to read 1.0 OD in a 1 cm cuvette at a given wavelength (let’s say it was Coomassie blue and you measured at 595 nm); then take exactly 108 ul and place in a well of the 96-well plate you are using and measure the absorbance at 595 nm (and let’s suppose you get 0.25); so at a path length of 1 cm you got OD =1, at the well depth pathlength you got 0.25; so the pathlength is 0.25 cm 2. Now you know the pathlength in this buffer (which accounts for a meniscus effect from any detergent, etc. in the buffer). So Measure as in (a) above and let’s assume you get the same values as in (a) above: Then the diff in OD = 0.48-0.15 = 0.33; the time interval was 27 min; the amount of protein was 50 ug; the total volume was 108 ul and the datasheet tells you the extinction coefficient is 37000 M-1 cm-1. So: amount of product = (108 ul) x ((0.33)/(37000 x 0.25)) x (1L/1000000 ul) x (1000000000 nmol/mol)= 3.853 nmol and this was measured over 27 min and using 50 ug so = 3.853 nmol/(27 min x 50 ug) = 0.00285 nmol/min/ug. OR to convert to a common U (umol/min) and per mg would get the same value since 1000 nmol/umol and 1000 ug/mg cancel each other out so = 0.00285 U/mg

2.)

I can confirm that the source of the NE buffer is Jurkat cells.

3.)

I am sorry to confirm that we do not offer a Jurkat cell lysate suitable for this purpose at the moment. But I would like to reassure you that you will not need it for this kit, because the NE buffer acts as a positive control.

I hope this information is helpful. Please do not hesitate to contact me again with any further questions.